Hématologie - Cours 7 Pathologie Flashcards
1
Q
Quelles sont les indication d’un examen extemporané?
A
-
Diagnostic histopathologique rapide
- Type de tumeur?
- Bénin/malin?
-
Opinion macroscopique rapide
- Taille de la tumeur
- État des marges de résection chirurgicales (en enlever plus?)
- Indication principale!
-
Prélèvement particulier
- Congélation à -80°C, microbiologie
- Certains tests sont incompatibles avec le formol (perte de sensibilité) Ex : Bio mol
2
Q
Nommer différents types de spécimens reçus au laboratoire de pathologie
A
- Types de prélèvement :
- Biopsie
- Pièces chirurgicales
- Liquides (cytologie)
- État du prélèvement :
- Frais
- Tx rapide requis! Ajout de fixateur rapide pour limiter l’altération du spécimen
- Dans un fixateur (formol, alcool)
- Frais
3
Q
Quelle étape suit l’étape de circulation (avant la coupe du tissus) ?
A
Inclusion/enrobage en paraffine
- Tissus déposé dans un moule
- Paraffine coulée dans le moule
- Doit refroidir
- Support pour couper l’échantillon
4
Q
Discuter de l’importance de l’étape de fixation
A
Important pour immobiliser les composantes cellulaires d’un tissus dans un état aussi proche que possible de l’état vivant tout en assurant sa conservation
- Base du processus en pathologie
-
Qualité de la fixation est capitale pour le bon déroulement des étapes subséquentes
- Impact le reste du processus et l’interprétation du spécimen (limité si dégradé)
- Les gros spécimens doivent être coupés pour permettre de préserver les parties centrales
5
Q
Quel instrument est utilisé pour effectuer des coupes très minces de tissus pour produire les lames d’histologie?
A
Un microtome
6
Q
Qu’est-ce qu’un examen extemporané?
A
Interprétation rapide (< 20 mins) d’un prélèvement frais dans un contexte chirurgical. Préparation de la lame d’histologie par congélation
- Pathologiste de garde
- Examen macroscopique rapide
7
Q
Nommer les procédés de routine en pathologie, de la réception des prélèvements à l’obtention des lames histologiques
A
Préanalytique :
- Réception
- Fixation (formol)
- Description macroscopique
- Circulation (paraffine)
- Coupe
- Coloration et montage
Analytique et post-analytique :
- Analyse des lames
- Dictée/transcription
- Validation/envoi des rapports
8
Q
Qui effectue l’étape de description des spécimens?
A
Variable selon le type de prélèvement :
- Biopsie = équipe technique
- Pièce chirurgicale = Patho ou assistant Patho
9
Q
Quels sont les rôles du pathologiste?
A
- Rôle diagnostic
- Temps d’analyse important
- Rôle en recherche clinique et fondamentale
- Enseignement et formation
- Examen extemporané : Diagnostics rapides sur place (garde)
- Fait parti d’équipes multidisciplinaire (collaborateur pour Tx)
10
Q
Quelles sont les étapes d’un examen extemporané?
A
- Prélèvement sur la pièce fraiche (résection chirurgicale)
- Congélation rapide (azote liquide)
- Coupe au cryostat
- Température froide dans l’appareil
- Étalement sur la lame
- Coloration express
- Lecture au microscope
- Communication des résultats en < 20 minutes
11
Q
Combien de temps est requis pour préparer une lame d’histologie?
A
24h + le temps de fixation (variable selon la grosseur du tissus)
12
Q
Quelles étapes aditionnelles doivent être effectuées lors de la description des pièces chirurgicales et qui n’est pas effectuée lors de la description des biopsie?
A
- Examen macriscopique comprenant la mesure des lésions si présentes
- Sélection des prélèvements qui seront envoyés pour l’examen histologique
**Protocoles standardisés
13
Q
Quels sont les inconvénients de la cytologie?
A
- Diagnostic difficile et limité : Absence d’architecture tissulaire
- Peut être moins précis (défi)
- Codes Dx plus flous
- Fixation à l’alcool rend les immunohistochimies difficiles
- Nombre de tests limité
14
Q
Vrai ou faux : La description des prélèvements peut être effectuée avant ou après l’étape de fixation
A
FAUX
L’étape de description s’effectue une fois que les spécimens sont fixés
15
Q
Quelle est l’utilité de l’étape de circulation?
A
Essentielle pour solidifier le tissus et pouvoir couper le tissus en tranches minces (3-4 µm) pour préparer les lames d’histologie
16
Q
En combien de temps un résultat préliminaire est-il normalement disponible pour une biopsie? pour une chirurgie?
A
- Biopsie : 24-48h
- Chirurgie : 2-3 jours
- *Possible d’avoir un résultat préliminaire au besoin*
- Lorsque les prélèvements ne sont pas urgents, environ 7 jours pour avoir un résultat de biopsie*
17
Q
Qu’est-ce que la cytologie?
A
- Étalement sur lame à partir de spécimens liquides
- Spécialité en soi
- 1ere approche pour certaines choses (Ex : VPH)
18
Q
En quoi consiste l’étape de coloration?
A
Coloration de base de la lame et montage :
- Coloration des tissus (automatisé, bacs)
- Montage de la lame : ajout d’une lamelle sur tissus coloré
19
Q
En quoi consiste l’étape de circulation?
A
“Remplir le spécimen de paraffine”
- Remplacer l’eau des tissus par de la paraffine
- Cycle de 12h pendant la nuit
20
Q
Quelles sont les étapes analytiques suite à l’obtention de la lame d’histologie?
A
- Interprétation au microscope par le pathologiste
- +/- demande de techniques supplémentaires!
- Dictée du compte rendu
- Transcription du compte rendu
- Validation
- Envoi du compte-rendu
21
Q
Quelles sont les limites d’un examen extemporané?
A
- Technique grossière = réponse grossière
- Interprétation grossière!
- Ce qui est congelé est altéré
- Possibilité d’artéfact
- Morphologie cellulaire altérée
- Moins beau que fixation
- Plis, superposition de tissus/cellules
- Congélation n’est pas la méthode préférée (slmt/surtout lorsque Dx rapide nécessaire)
22
Q
Comment les fines coupes de tissus sont-elles fixées sur les lames?
A
Fixation avec un bain d’eau
23
Q
Quelles sont les conditions à respecter pour favoriser une bonne fixation?
A
- Volume de fixateur : 10x le volume du prélèvement
- Temps requis pour la fixation : 1 mm/h
- Couper les gros spécimen pour s’assurer de préserver l’intégrité des parties centrales
*Surfixation peu altérer les protéines (impact pour études immunohistochimie)
24
Q
Quels sont les avantages de la cytologie?
A
- Prélèvement moins invasif, généralement facile à obtenir
- Rapide (Pas de circulation, inclusion, coupe)
- Recherche d’ADN HPV et autres agents infectieux
25
Quelle est la différence entre cytologie et histologie?
**Cytologie** : l'étude des cellules isolées
**Histologie** : l'étude morphologique des tissus biologiques
26
Quel est le but principal d'un examen extemporané?
Dans le but principal de modifier le geste chirurgical en cours. Diagnostic doit être émis en \< 20 minutes
27
Quels sont les différents types de prélèvements pouvant être reçus pour un examen cytologique?
* Type exfoliatif
* gényco
* épenchement pleural
* Aspiration à l'aiguille fine
* Nodule thyroïdiens
28
Quelles sont les indications pour une cytologie?
Dépistage vs diagnostic
29
Quel est le protocole associé à un prélèvement pour une étude cytologique?
* Prélèvement reçu en tube
* Centrifugation
* Étalement sur lame et coloration
* Coloration vue par un cytotechnologiste en première ligne
* ID cellules et propose un Dx
* Pathologiste revoit les lames
30
Nommer différentes techniques complémentaires (à l'histologie/cytologie) en pathologie?
* Colorations spéciales
* Études immunohistochimiques
* Étude en immunofluorescence
* Hybridation in situ
31
Nommer des indications pour demander une coloration spéciale
* Agent infectieux
* Amyloïdose
* Envahissement vasculaire
* Pigments
* Mucine
* ...
Plusieurs indications!
32
Quel est l'avantage de la coloration spéciale?
* Peut permettre de mettre en évidence certaines composantes sans devoir faire une étude immunohistochimique
* technique manuelle vs automatisée
33
Quel est le principe des études innumohistochimiques et de l'immunofluorencence?
* Mise en évidence d'un Ag tissulaire (protéine) par une réaction Ag-Ab
* Ab dirigé contre un Ag que l'on recherche sur la lame histologique
* Mise en évidence de la fixation Ab-Ag par
* Un chromogène (immunohistochimie)
* Un fluorochrome (immunofluorescence)
34
Nommer un avantage et un inconvénient aux techniques complémentaires
* Permet un meilleur Dx
* Ajoute un délai de réponse et $$$
35
Sur quel type de lame/prélèvement effectue-t-on une immunohistochimie normalement? Une immunofluorescence?
IHC : Coupe en paraffine
IF : Tissus congelé
36
_Vrai ou faux :_ Les immunofluorescences (IF) et les immunohistochimies (IHC) utilisent toujours un Ab primaire et un Ab secondaire
**FAUX**
Les IF et IHC peuvent être effectuées avec 1 seul Ab couplé à un fluorochrome
37
Quels sont les 2 types d'Ab primaire pouvant être utilisés pour faire une immunohistochimie (IHC)? Quels sont les avantages et inconvénients pour chaque type
* **Polyclonaux**
* Généralement moins cher
* Plusieurs épitopes reconnus = marquage + intense
* **Monoclonaux**
* Spécificité définie (1 épitope ciblé)
* Moindre sensibilité en cas d'altération des épitopes
38
Combien de temps est requis minimalement pour effectuer une immunohistochimie?
Au moins 24h (processus automatisé)
39
_Vrai ou faux_ : Les immunohistochimies sont rarement demandées par les pathologistes puisque c'est trop dispendieux
**FAUX**
C'est la base en pathologie. Ils se fient beaucoup sur ça pour leur diagnostics
40
Quels sont les avantages/désavantages des immunohistochimies (IHC)?
Très utile, mais l'interprétation n'est pas toujours facile
* Bruit de fond
* Cas douteux
* Sensibilité/spécificité variable
41
_Vrai ou faux_ : Pour chaque technique complémentaire en pathologie on doit avoir des contrôles positifs sur chaque lame
**VRAI**
42
Quelle est la différence entre une immunofluorescence directe et indirecte?
* Directe : Ab primaire marqué
* Indirecte : Ab primaire reconnu par un Ab secondaire marqué
43
Quelles sont les principales indications d'une étude immunohistochimique?
* Diagnostic :
* Diagnostic de malignité/bénignité
* Tumeur indifférenciée
* Ex : mélanome, carcinome, adénome
* Tumeur d'origine inconnue (métastase)
* Tumeur avec différenciation particulière
* Ex : typage d'un lymphome (pour spécificité Tx)
* Infection
* Ex : CMV, Herpès, p16
* Marqueurs pronostiques/réponse thérapeutique
44
Nommer quelques marqueurs pronostiques ou de réponse thérapeutique qui peuvent être recherchés par immunohistochimie
* Ki-76
* **HER2**
* Récepteurs hormonaux
* MSI
* C-Kit
* **ALK, EGFR**
45
Quel pourcentage des tumeurs sont d'origine inconnue ou indifférenciée?
**5-15% des tumeurs**
* Adénocarcinomes 80-90%
* Carcinome squameux 5-10%
* Néoplasmes indifférenciés 5-10%
* Carcinome, lymphome malin, carcome, mélanome malin, tumeur cellules germinales
46
Quel est le principe de la technique d'hybridation in situ?
**Identification de séquence d'ADN/ARN**
* Application sur lame de **sondes d'ADN ou d'ARN monocaténaire marquées** qui sont **complémentaires** de séquences d'ADN ou d'ARN que l'on recherche sur la coupe
* Effectué sur coupe en **paraffine**
47
Quels sont les 2 principes de détection du signal en hybridation in situ?
* Fixation révélée par histoenzymologie (chromogène) ou par un fluorochrome (FISH : Fluorescent hybridation in situ)
* Nom de la technique change selon la nature du marquage (système de détection)
48
Donner un exemple d'utilisation de l'hybridation in situ
**_Identification du nombre de copie d'un gène pour déterminer s'il y a amplification du gène :_**
* Sonde spécifique à un gène
* Sonde spécifique au centromère
* Ratio entre # de gène et # de centromère
Ex : HER-2/Neu
49
Discuter de l'utilité clinique de l'investigation des marqueurs HER2/Neu (technique complémentaire)
**_Her2/Neu :_**
* Amplifié dans 15% des carcinomes mammaires
* Récepteur membranaire (localisé aux membranes en IHC)
* Facteur pronostic
* Tumeurs HER2 + sont associées à une survie plus courte, récidives précoces (faible pronostic)
* Facteur prédictif fort pour Tx ciblé
* HER2 + = réponse au Herceptin et aux anthracyclines
* HER + = réponse faible à l'hormonothérapie
* Résultats gradés (0, 1+, 2+, 3+)
* Recommandations strictes
* Algorithme à suivre pour les résultats douteux (2+)
50
Discuter des limites d'interprétation du Her2
**_Faux négatifs_**
* Faible sensibilité
* Erreurs techniques (Ab non ajouté...)
**_Faux positifs :_**
* Interprétation carcinome in situ au lieu de carcinome infiltrant
* Interprétation réaction cytoplasmique comme positif
* Edge Artifact
* Technique trop sensible (CQ neg normalement négatif)
51
Dans quelle circonstance un FISH est-il nécessaire pour HER2/Neu (Carcinome mammaire)?
Lorsque l'immunohistologie classifie le résultat de douteux (2+). Référé en FISH
52
Discuter de l'utilité du marqueur HER2-Neu dans le carcinome gastrique/gastro-oesophagien
* Prédit une réponse thérapeutique au trastuzumab (Herceptin)
* Facteur pronostif négatif
* Algorithme pour Dx (résultat 2+ nécessite FISH)
* Critères de positivité différents
* Patron de marquage différent, moins souvent circonstentiel
* Plus grande hétérogénéité d'expression
53
Qu'est-ce que le syndrome de Lynch (HNPCC)?
* Autosomal dominant **(implique une composante héréditaire)**
* Les patients atteints de mutations impliquant les gènes de la réparation des mésappariement de l'ADN
* Perte de fonction de protéine : MLH1, MSH2, MSH6 et PMS2
* Accumulation d'une variété de mutations à travers le génome, **incluant une altération dans la longueur des séquences répétitives microsatellites (MSI)**
54
Quelles sont les complications associées au syndrome de Lynch?
* Jeune âge d'apparition
* Plusieurs types de cancers possibles :
* Cancer colorectal
* Cancer de l'endomètre
* Cancers synchrones/métachrones
## Footnote
***Important d'identifier la mutation héréditaire car ça nous dit que toutes les cellules de l'organisme contiennent 1 copie mutée du gène. Pas les mêmes probabilités de développer un cancer***
55
Pourquoi faut-il investiguer l'instabilité microsatellite chez un patient atteint d'adénocarcinomes colorectaux?
* Adénocarcinomes colorectaux :
* 3% causés par syndrome de Lynch
* 13% ont une instabilité microsatelittaire
* La perte d'expression en immunohistochimie et la présence d'instabilité microsatellite ne sont pas Dx du syndrome de Lynch
* Mutations sporatiques peuvent causer instabilité microsatellite
* Pourquoi tester?
* Pronostic favorable chez patients avec instabilité microsatellite
* Prédiction de la réponse thérapeutique
* Orientation du patient vers le séquençage pour l'ID d'une mutation germinale du syndrome de Lynch
56
Quels sont les tests complémentaires à faire sur des prélèvements d'adénocarcinome colorectal?
* Immunohistochimie pour vérifier la perte d'expression des protéines MLH1/PMS, MSH2/MSH6
* 83% sensibilité
* 89% spécificité
* Recherche d'instabilité microsatellite
* Recherche d'expension/réduction des régions microsatellites par PCR en comparant avec tissus normal
* 80-91% de sensibilité lorsque mutation MLH1 ou MSH2
* 90% spécificité
57
Quelle peut être l'utilité clinique d'effectuer une immunohistochimie sur un carcinome pulmonaire non à petites cellules?
* Mutations sont mutuellement exclusives pour le type de carcinome non à petites cellules
* Associées à des Tx et Px uniques
* Permet classifier type de carcinome pulmonaire non à petite cellules
* Gènes KRAS, EGFR, ALK
58
Quel tyoe de prélèvement doit être utilisé pour effectuer une immunohistochimie sur un carcinome pulmonaire non à petites cellules?
* Spécimen de résection pulmonaire
* Biopsies bronchique ou trans-thoracique
* Spécimen de cytologie (liquide pleural, EBUS, lavage bronchique)
* DOIVENT ÊTRE MIS EN BLOCS CELLULAIRES (Pour coupe au cryostat)
* Cancer primaire ou métastases
59
Nommer des exemples de spécimen rejeté pour l'étude immunochimique d'un carcinome pulmonaire non à petites cellules?
* Nombre insuffisant de cellules tumorales (100 cellules)
* Cellules tumorales dispercées sur la lame
* Spécimen épuisé (couvent biopsie): on ne peut pas faire l'IHC
* Absence de bloc cellulaire (cytologie)
* Présence de nombreux lymphocytes qui viennent diluer l'ADN tumoral
**La qualité du spécimen est très importante!**
60
Quel est l'avantage de procéder par l'immunohistochimie/IF plutôt que l'extraction d'ADN pour l'étude des lésions tumorales de carcinome pulmonaire non à petites cellules?
Plus rapide (3-5 jours pour IHC vs 5-10 jours pour séquençage)
* L'immunohistochimie/IF permet de
* IHC : Détecter la présence ou l'absence de la protéine d'intérêt
* IF : Détecter des réarrangements des gènes
61
Discuter de la détection de réarrangements du gène ALK par immunohistochimie (carcinome pulmonaire non à petites cellules)
La présence d'un réarrangement du gène ALK cause une surexpression de la protéine ALK visible en immunohistochimie
* Les résultats douteux ou positifs sont confirmés par FISH
* Utilise 2 sondes qui sont collées si pas de réarrangement, mais espacées si présence d'un réarrangement
* Positif si \> 15 cellules sont positives
* Option rapide et efficace de détecter les réarrangements géniques
62
Quel est l'intéret d'investiguer le marqueur PD-L1 dans le carcinome pulmonaire non à petites cellules?
**PD-L1 :**
* Ligand du récepteur PD-1
* Régule l'activité à la baisse des lymphocytes T
* Surexpression dans les carcinomes pulmonaires non à petites cellules
* Protège les cellules tumorales en inhibant l'activation des lymphocytes Tc
* Impact Px et Tx pour les patients
* Facteur prédictif de la réponse au Pembrolizumab (inhibe activité du récepteur PD-1 : réactivation des cellules Tc)
* Si forte expression de PD-1 = Px thérapeutique
63
Nommer 3 techniques d'analyse des biopsies rénales
1. Microscopie optique (fixation au formol)
2. Immunofluorescence (tissus congelé)
3. Microscopie électronique (fixation à la glutaraldéhyde)
64
Nommer un exemple de diagnostic différentiel sur les biopsie rénales nécessitant un examen en immunofluorescence
Glomérulonéphrite à croissants
* Maladies des Ab anti-membranes basale glomérulaire
* Vasculite à ANCA
* Maladie à dépôts de complexes immuns (Ex: lupus)
65
Nommer des voies de l'avenir en pathologie
* Marqueurs pronostique / réponse thérapeutique
* Biologie moléculaire
* Pathologie numérique et télépathologie
66
Qu'est-ce que la pathologie numérique?
**Acquisition, partage et interprétation des données pathologiques dans un environnement digital (sur l'ordi!)**
* Lames de verre sont scannées pour produire des images digitales de haute résolution
* Lames digitalisées sont visualisées sur un écran (à distance!)
67
Quels sont les bénéfices de la pathologie numérique?
**_Amélioration de la qualité des soins :_**
* Diminution du délai de production des rapports de pathologie
* Augmente productivité des pathologistes
* Accessibilité simplifiée aux cas courants et aux cas archivés
* Amélioration de la qualité des données inclues au rapport de pathologie :
* Facilite les mesures, anotation
* Plusieurs lames observées côte à côte
* Outils d'analyse d'image
* Ajout d'image aux rapports (macro et microscopique)
* Possibilité de consulter des collèques inter-établissements
* Disponibilité en continu des sous-spécialités
* Diminution du temps associé aux envois
* Palie aux indisponibilités (congrès/vacances..)
* Maintient de la mission d'enseignement
* Enseignement à distance
* Standardisation de la pratique en CHU
* Atout pour le recrutement
* Partage d'image lors de réunions multidisciplinaires
* Contexte de recherche
68
Quelles sont les limites de la pathologie numérique?
***Limite financière d'implantation***
* Équipements
* Stockage des données
