GSVASH Flashcards
Explique para que serve e como se processa o teste de Ames: objetivo, processo, bactérias, fígado de ratinho, conclusões.
O teste de Ames serve para detetar a presença de agentes mutagénicos. Podem efetuar-se 2 tipos de testes: com bactérias e com enzimas de fígado de ratinho.
Para se realizar o teste com bactérias usaram-se estirpes de Salmonella auxotróficas, ou seja, que não são capazes de produzir os compostos necessários à sua sobrevivência, como a histidina, de modo que se tornam mais suscetíveis a mutações que a salmonela normal. Na realização deste teste utilizaram-se 2 culturas de bactérias: a cultura de controlo, que contém apenas o meio de agar com nutrientes e com bactérias; e a cultura experimental, que contém o meio de agar com nutrientes, as bactérias e o composto que se suspeita ser mutagénico para analisar. É de notar que nenhum dos meios contém histidina.
A cultura experimental é transferida para uma placa de Petri sem histidina, no qual as bactérias auxotróficas não conseguem crescer. Desta forma, um resultado positivo é indicado quando a estirpe deixa de necessitar de histidina para crescer, o que comprova a passagem de mutante a selvagem. Para além disso, se o resultado da análise indicar um valor maior ou igual a 2, estaremos na presença de um agente mutagénico.
No teste de Ames com fígado de ratinho, em primeiro lugar, as enzimas de ratinho são injetadas em animais com Arochlor. O tubo de teste continha o elemento em análise e enzimas de fígado animal (para que as bactérias conseguissem metabolizar este elemento químico), assim como as bactérias e sem histidina. As enzimas solubilizadas provêm do sobrenadante da trituração prévia de fígados de ratinho.
A mistura é plaqueada num meio sem histidina no qual as bactérias auxotróficas não conseguem crescer. Desta forma, se houver a presença de revertentes indica que o elemento químico é um mutagénio.
Descreve o que ocorre no ciclo lisogénico.
O fago infeta a bactéria, introduzindo o seu material genético no genoma da mesma e, de seguida, incorpora-se no cromossoma da bactéria. Assim, só se vai replicar quando houver replicação/reprodução da bactéria. Chama-se pró-fago. Quando o meio é pobre em nutrientes, há maior concentração de cAMP que inibe Hfl (mecanismo de defesa do hospedeiro) e que permite a expressão de CIII. Assim, a CIII estabiliza CII, que está aumentada, e por isso, há uma maior quantidade de CI e integrases a serem expressas. Quanto mais CI for expresso, este liga-se ao operador (na forma dimérica) e não deixa que haja transcrição do gene CRO e por isso, entra no ciclo lisogénico.
