Génie génétique Flashcards
enzyme de restriction
- produite par les bactéries
- coupenet l’ADN à une séquence spécifique
- > défense contre bactériophages : ADN viral coupé lors de l’infection.
le chromosome et plasmide bactérien de sont pas affecté pcq possèdent des groupements CH3 et donc elles sont protégé par enzyme de restriction
extrémité cohésive
produit par enzyme de restriction
coupe en escalier.
- grâce à cest bout, lorsque coupé, on peut ajouté du nouveau matériel génétique ce qui est seulement possible avec bout cohésif pcq il sont complémentaire.
vrai ou faux ?
le plasmide ainsi que l’ADN coupé par la même enzyme de restriction sont complémentaire.
VRAI !
il y a seulement complémentarité lorsque cest coupé par la même enzyme
ADN recombiant
insertion d’ADN dans un autre
plasmide recombinant
insertion d’ADN dans un plasmide
clonage génétique
- isolement de l’ADN du plasmide ( vecteur de clonage) et d’un ADN d’intéret
- coupage du plasmide et de l’ADN d’intéret par le même enzyme
- prod. plasmide recombiant entre ADN d’intéret et plasmide coupé
- transformation des bactérie par le plasmide produit.
- sélection des bactérie avec plasmide recombinant recherché
- identification de la bactérie contenant le plasmide recombinant.
- prod. massive des gènes recombinants ou des protéines associé
- isolement de l’ADN
choix du vecteur de clônage ( plasmide)
généralement un plasmide contenant 2 gènes de sélection
- résistance au antibiotique
- site de polyclonage
site de clonage
section de l’ADN pouvant être découpé par différente enzyme de restriction, où un gène sera inséré
- découpage des ADN
utilisation de la même enzyme de restriction
- coupe vecteur de clonage et ADN d’Intérêt
- crée bouts cohésif complémentaire
- plasmide recombinant
- mélange du vecteur et ADN d’intérêt
- lié par ADN ligase
- produit 3 type de plasmide possible
- > pas recombiné
- > 2 plasmide recombiné dont un contient le gène d’intérêt
- transformation des plasmides
intégration du plasmide dans la bactérie
la bactérie doit tjrs avoir les attributs contraire des gènes de sélection. sinon on ne peut rien détecter
4 combinaisons de bactérie transformé
multiplication des bactéries et sélection des récombinante.
en utilisant les gène de sélection !!!!!
—> gélose sélective
- identification du clone comportant le gène d’intérêt
si le gène donne une caractéristique à la bactérie
- mesurer sur bactéries recombinantes
- ex. gène d»’invasion, fission binaire
si caractéristique non mesurable
- autoradiographie
- PCR
autoradiographie
chaque point sur la membrane correspond à un puit ou se trouve une bactérie clône différente
- clône transférer sur une membrane de nilon
- bactérie sont lysée et monocaténaire
- ajout ADN sonde radioactive complémentaire au gène d’intéret
- pellicule radioactive mit sur la membrane de nilon
- clone qui ont le gène d«,intéret apparaisse sur la pellicule
SEULEMENT SI ON CONNAIT LE GÈNE
PCR
au départ les deux gènes sont monocaténaire.
les amorce servent de barrière donc elles copie seulement ce qui se trouve entre. par ADN polymérase réplication de lADN dirigé.
apres on fait l’électrophorèse ou on met un colorant qui détecte ADN.
mutagénèse
étude de la fonction d’un gène
introduire mutation de manière précise ou aléatoire
si c’est avec un transposon cest
aléatoire: on veut savoir ou le transposon c’est placer dans le gène si il est dans le gène celui-ci perd sa fonction ou une de ses fonctions.
gène muté : protéine avec fonction modifié
on peut donc trouver la fonction initial d’un gène en mesurant ce qui à été modifié
mutagénèse pas transposon
transposon saute d,un endroit à l’autre dans l’ADN = mutation
- on met plasmide avec gène d’intérêt ensemble = plasmide muté–> on transforme bactérie avec plasmide
- on sélectionne bactérie avec transposon pour savoir si il c’est placé à l’intérieur du gène ou à l’extérieur ou soit plasmide reste intacte
si on veut sélectionner plasmide avec juste un transposon on doit ajouter un gène de sélection . sélection des clone
les plus long on le transposon et reste plus en haut du gel
l,amorce fait que même si transposon à l’extérieur il a la même longueur.
- PCR pour choisir bactérie ayant transposon dans le gène d’intérêt.
on mesure un changement dans une bactérie ayant un plasmide muté = indentification de la fonction du gène d’intérêt
thérapie génique
introduction d’un gène dans un cellule humain
potentiel thérapeutique élevé : traitement contre le cancer , diabète , traitement contre le VIH …
principe thérapie génique
on modifie le viruse de sorte qu’il ne puisse plus se répliquer = inoffensif
on intègre le gène a transmettre dans le virus
on l’intègre au cellules humain le virus infecte cellule et transfert matériel génétique avec gène qu’on lui a implanté.
plante transgénique
- on isole plasmide Ti de l’Argrobactérium tumefociens
- gène de sélection ADN T ou se trouve le site de restriction
- g:ene d’intérêt vient s’inséré sur le gène de sélection entre le site de restriction
- plasmide recombiné peut être introduit dans dans l’ADN chromosomique des plantes = prod de plantes contenant nouveau caractère.
