Fuck Bio Haha Flashcards
Antennapedia
Transcription factor that tells specify genes to turn on during development
What’s a vector?
Specialized plasmid that was engineered to carry out specific functions
cDNA
DNA synthetised from a single stranded RNA (mRNA or miRNA) by the action of the ez reverse transcriptase
Ribonuclease H or RNase H
Enlève le segment de RNA dans un dsRNA:DNA (une solution alkaline peut aussi imiter cette fonction en brisant tous les liens H)
cDNA libraries
-Quand on veut se concentrer sur les protéines coding genes
-Isoler le mRNA de tRNA et de rRNA : oligo T nucleotides linked to a solid support. Wash the junk.
Poly A linked avec T: ça sert de primer pour RT
-On enlève le RNA avec solution alkaline ou RNase-H.
-On ajoute un polydG adapter. On prime avec un poly dC. Là on obtient un ds cDNA.
-Ajouter des restrictions sites aux deux bouts pour pouvoir insérer dans un plasmid.
-la library est représentative du nombre de mRNA de chaque sorte dans l’organisme
Polynucleotide Kinase
Phosphorylation of nucleotides by adding gamma (y) phosphate of ATP to the free hydroxyl at 5’end of the oligonucleotides. Ça rend radioactif : utiliser pour faire des probes qui sont visibles
Lac promoter
Quand on ajoute du galactose, le gène downstream se fait transcrire
How to transfect a vector in animal cell
Lipid treatment or electroporation
Solid support
Nitrocellulose for RNA
Nylon for DNA
Probe
Single stranded nucleic acid complementary with target (acts as a visual aid, donc a quelque chose pour qu’on le voit)
2 ways to make probes
Polynucleotide kinase: takes the y phosphate of ATP and put it on free hydroxyl of 5’end of the oligonucleotide (makes radioactive)
By PCR: sauf qu’on utilise certains nucleotides radiolabeled on their alpha phosphate (watch out, you have to make it single-stranded before using it)
Why alkaline solution dénature DNA
Bc less H in the solution, plus OH- qui attire les H des liaisons entre bases
Ca2+ binding protein
Calmodulin: quand avec Ca, binds to other prots (because other conformation) in a Ca2+ dépendant manner
Plastid
Organelle for transcription in plants and algae
Poison that affects Pol
Alpha-amanitin
SDS
Sodium Dodecylsulfate
ChIP-chromatin immunoprecipitation
Antibody + agarose beads.
Antibody recognizes phosphorylated residues on CtD of elongating (or pausing) Pol II.
Centrifugation.
Next-gen sequencing of DNA/RNA bound to the Pol II
To find actively transcribed genes
Reporter genes
Gives info about relative efficiency of transcription (luciferase, bc gives light or GFP)
Recognition helix
Alpha-helical domain of the transcription factors that binds with non-covalent interactions with the bases in the major groove
EMSA
Electrophoretic mobility shift assays
Savoir quel bout de ton promoter est bound par des transcription factors
Make dsDNA radiolabbeled probe de ton cis-element qui est important + electrophoresis. Ceux qui vont pas loin: bound to proteins
Acetylation
Rend histone + chargé donc interagit plus avec DNA
P-TEFb or CDK9
Phosphorylation of Ser2
Hybridation experiment
To find existence of introns!
RNP
Ribonucleoprotein
Self splicing introns
Group I: nuclear rRNA in protozoan
Group II: tRNA and rRNA in mitochondria and chloroplasts
Ce qu,on fait avec le lariat intron
Debranching enzyme: rend ça linéaire et après chewed up
Sequence that contains the polyadenylafion signal (AAUAAA)
Recognized by cleavage and polyadenylation stimulating factors
Cleaved at the polyA site
+ PAP
RNA editing
Ça change À to I et C to U (attention Ca peut causer un stop codon plus tôt)
NLS
Nuclear localisation signal : sur protéine qui doit aller dans le noyau
mRNA exporter
2 subunits: NXF1 and NXT1
2 organismes vraiment importants
E.Coli + bacteriophage lamba