Fotometria

Question 1

Conceito de fotometria

Answer 1

Estudo do fenômenos de absorção da luz por moléculas em solução;

Question 2

Quando um feixe de luz de comprimento de onda específico atravessa uma solução, uma certa quantidade de luz é absorvida pela solução ______________ e a intensidade da luz que sai da solução ______________ diminui.

Answer 2

absorbância/ absorvância

transmitância

Question 3

Lei de Lambert- Beer

o que ela diz?

Answer 3

Quanto mais concentrado/ espesso for o meio absorvente (solução), maior será a absorbância e menor será a transmitância;

absorção é diretamente proporcional ao caminho ótico percorrido pela radiação aplicada na amostra.

quanto maior a distância que a luz percorrer, mais luz será absorvida.

Além disso, a transmissão é inversamente proporcional à concentração da solução e inversamente proporcional ao caminho ótico percorrido pela radiação. Ou seja, a transmissão diminui quando a concentração da solução e/ou o caminho ótico percorrido aumentam.

Question 4

São exemplos de técnicas fotométricas:

cite 6

Answer 4

colorimetria, espectrofotometria, quimioluminescência, nefelometria, turbidimetria e fotometria de chama.

Question 5

Requisitos para a Lei de Lambert- Beer

Answer 5

• partículas da amostra devem absorver a luz de forma independente
• o meio absorvente deve ser homogêneo
• a radiação precisa ser colimada (raios paralelos)
• radiação deve ser monocromática
• fluxo de radiação que incide na solução não pode desestabilizar os átomos/ moléculas ou íons da solução

Question 6

A espectrofotometria é a medição da intensidade da luz em comprimento de onda entre o ________ e o _________

Answer 6

entre o ultravioleta e o infravermelho

Question 7

enquanto a espectrofometria é capaz de medir a intensidade da luz em comprimentos de onda entre o ultravioleta e o infravermelho, a colorimetria é capaz de determinar a concentração de analitos apenas no espectro visível da luz entre ______________

Answer 7

400- 680 nm

Question 8

Quimioluminescência

o que é

Answer 8

• São reações colorimétricas com anticorpos marcados;
• geralmente esses Ac são marcados com fosfatase alcalina
• Ac hidrolisam substrato quimioluminescente (luciferina, luminol, etc)

Question 9

Turbidimetria

O que é

Answer 9

Medida do grau de turbidez de uma suspensão; Se baseia na medida da redução da transmissão da luz em um meio devido a formação de partículas e turvação da solução. é uma técnica complementar à nefelometria

Question 10

Nefelometria

O que é

Answer 10

Técnica para medir o conteúdo de partículas em suspensão ou a turbidez de um meio.
Mede a luz dispersa após contato com a solução turva.

Question 11

Diferença entre turbidimetria e nefelometria

Answer 11

turbidimetria: medida da luz transmitida após contato com a solução turva;
Turbidimetria -Transmissão - mede a luz absorvida.

nefelometria: medida da luz dispersa/difundida após o contato com a solução turva.

Question 12

FOTOMETRIA DE CHAMA

o que é

Answer 12

• técnica simples baseada na espectrometria atômica;
• amostra com cátions metálicos é inserida em uma chama e analisada pela quantidade de radiação emitida;

Question 13

Fluorimetria

Answer 13

mede a intensidade e a distribuição do comprimento de onda do espectro de emissão após excitação por um determinado espectro de luz.

fluorímetro/fluorômetro: espectrômetro para medir fluorescência;

Question 14

CITOMETRIA DE FLUXO

Answer 14

• técnica usada para medir características químicas e físicas de células ou partículas
• amostra contendo células fica suspensa em fundo e injetada no citômetro de fluxo

-a luz dispersa é característica das células e de seus componentes;

Question 15

INCORRETA. Apesar de o uso de marcadores fluorescentes ser comum na citometria de fluxo, este elemento não é obrigatório.

• essa técnica necessita do uso de marcadores fluorescentes.

V ou f

Answer 15

INCORRETA. Apesar de o uso de marcadores fluorescentes ser comum na citometria de fluxo, este elemento não é obrigatório.

Question 15

CITOMETRIA DE FLUXO

A dispersão da luz pode ser usada para medir:

a) Volume (Por dispersão frontal - FSC)
b) Granulosidade/ complexidade (Por dispersão lateral - SSC)

Question 16

CITOMETRIA DE FLUXO

Indique Certo ou Errado

a citometria de fluxo identifica as células da amostra apenas por marcação com anticorpos específicos ligados a fluorocromos, através da intensidade de fluorescência

Answer 16

Errado

Além da fluorescência, os detectores também captam a luz dispersa à medida que o laser atravessa cada célula ou partícula.

Question 17

CITOMETRIA DE FLUXO

Indique Certo ou Errado

tem como parâmetros de dispersão frontal e dispersão lateral da luz que informam respectivamente, granulosidade\complexidade celular e tamanho\forma celular.

Answer 17

errada.

A dispersão frontal (Forward Scatter - FSC) se relaciona ao volume celular, enquanto a dispersão lateral (Side Scatter - SSC) associa-se à granulosidade ou complexidade celular.

Question 18

CROMATOGRAFIA

é uma técnica utilizada para ________________ de uma __________

Answer 18

separar componentes de uma mistura

Question 18

CROMATOGRAFIA

Diferenças sutis no coeficiente de partição de um composto resultam em retenção diferencial na fase estacionária, afetando a separação.

V ou f

Answer 18

verdadeiro

Question 19

CROMATOGRAFIA GASOSA (CG)

• técnica popular de cromatografia para separar compostos ou substancias voláteis;

-fase móvel: gás ex: gás Hélio.
- fase estacionária: liquido alto ponto de ebulição

Question 20

CROMATOGRAFIA GASOSA (CG)

Fase móvel: transporte a mistura até a fase estacionária; Seus compostos interagem com a a fase estacionária à medida que passam.

• Sob a mesma força motriz, o tempo de retenção dos diferentes componentes difere na coluna, saindo da coluna em ordens diferentes;

Question 21

CROMATOGRAFIA GASOSA (CG)

é uma vantagem da CG a alta eficiência de separação e velocidade de análise.

V ou F

Answer 21

Verdadeiro

Question 22

CROMATOGRAFIA GASOSA (CG)

é uma desvantagem da CG a o fato dela só analisar substâncias voláteis;

V ou F

Answer 22

Verdadeiro.

Question 23

CROMATOGRAFIA LÍQUIDA

• Técnica de separação;
• Fase móvel: líquido
• A amostra com o líquido passará por uma coluna (que é embalado por uma fase estacionária composta por partículas de formato esférico)
• Diferentes solutos reagirão com a fase estacionária causando separação dos compostos;
• HPLC: (Hight Performance Liquid chromatography): usa partículas muito pequena com pressão alta para separações analíticas de soluções;

Question 24

CITOMETRIA DE FLUXO

Answer 24

A citometria de fluxo é um método amplamente utilizado para analisar a expressão da superfície celular e de moléculas intracelulares, caracterizando e identificando diferentes tipos de células em uma população celular heterogênea, avaliando a pureza de subpopulações isoladas e analisando o tamanho e a complexidade das células. A partir da citometria de fluxo também é possível separar populações celulares diferentes. Dessa forma, esta técnica permite a análise simultânea multiparâmetros de diferentes populações celulares.

Question 25

Ao realizar uma técnica fotométrica, devemos fazer um “tubo branco” contendo apenas o reagente e água, para anular a interferência da cor inicial do reagente no tubo teste.

Verdadeiro ou falso

Answer 25

Verdadeiro

Question 26

A Imunoturbidimetria mede a diminuição da luz ao passar por um complexo antígeno-anticorpo, ou seja, mede o quanto esta solução absorve da luz e o quanto ela deixa passar. Essa técnica, assim como a nefelometria, é usada para medir a concentração plasmática de diversas proteínas.

Certa ou errada

Answer 26

Certa: A turbidimetria é um método que se baseia na medida da redução da transmissão de luz em um meio, causada pela formação de partículas e consequente turvação da solução.

Question 26

A Nefelometria é uma técnica frequentemente empregada para medir as concentrações de IgA, IgM e IgG e outras proteínas plasmáticas.

V ou F

Answer 26

Certa: a técnica de nefelometria pode ser empregada na medição de imunoglobulinas e outras proteínas plasmáticas.

Question 27

A principal diferença entre nefelometria e turbidimetria é que na nefelometria a luz difundida, ou seja, aquela que atravessa a solução é medida, enquanto que na turbidimetria a luz não difundida (a absorvida) é medida.

Certa ou errada?

Answer 27

Certa
Turbidimetria é a medida da luz transmitida após contato com solução turva. Nefelometria é a medida da luz dispersa após contato com solução turva.