Fotometria Flashcards
Conceito de fotometria
Estudo do fenômenos de absorção da luz por moléculas em solução;
Quando um feixe de luz de comprimento de onda específico atravessa uma solução, uma certa quantidade de luz é absorvida pela solução (nome do processo) e a intensidade da luz que sai da solução (nome do processo) diminui.
absorbância/ absorvância
transmitância
Lei de Lambert- Beer
o que ela diz?
Quanto mais concentrado/ espesso for o meio absorvente (solução), maior será a absorbância e menor será a transmitância;
absorção é diretamente proporcional ao caminho ótico percorrido pela radiação aplicada na amostra.
quanto maior a distância que a luz percorrer, mais luz será absorvida.
São exemplos de técnicas fotométricas:
cite 6
colorimetria, espectrofotometria, quimioluminescência, nefelometria, turbidimetria e fotometria de chama.
Requisitos para a Lei de Lambert- Beer
- partículas da amostra devem absorver a luz de forma independente
- o meio absorvente deve ser homogêneo
- a radiação precisa ser colimada (raios paralelos)
- radiação deve ser monocromática
- fluxo de radiação que incide na solução não pode desestabilizar os átomos/ moléculas ou íons da solução
A espectrofotometria é a medição da intensidade da luz em comprimento de onda entre o ________ e o _________
entre o ultravioleta e o infravermelho
enquanto a espectrofometria é capaz de medir a intensidade da luz em comprimentos de onda entre o ultravioleta e o infravermelho, a colorimetria é capaz de determinar a concentração de analitos apenas no espectro visível da luz entre ______________
400- 680 nm
Quimioluminescência
o que é
- São reações colorimétricas com anticorpos marcados;
- geralmente esses Ac são marcados com fosfatase alcalina
- Ac hidrolisam substrato quimioluminescente (luciferina, luminol, etc)
Turbidimetria
O que é
Medida do grau de turbidez de uma suspensão; Se baseia na medida da redução da transmissão da luz em um meio devido a formação de partículas e turvação da solução. é uma técnica complementar à nefelometria
Nefelometria
O que é
Técnica para medir o conteúdo de partículas em suspensão ou a turbidez de um meio.
Mede a luz dispersa após contato com a solução turva.
Diferença entre turbidimetria e nefelometria
turbidimetria: medida da luz transmitida após contato com a solução turva;
Turbidimetria -Transmissão - mede a luz absorvida.
nefelometria: medida da luz dispersa/difundida após o contato com a solução turva.
FOTOMETRIA DE CHAMA
o que é
- técnica simples baseada na espectrometria atômica;
- amostra com cátions metálicos é inserida em uma chama e analisada pela quantidade de radiação emitida;
Fluorimetria
mede a intensidade e a distribuição do comprimento de onda do espectro de emissão após excitação por um determinado espectro de luz.
fluorímetro/fluorômetro: espectrômetro para medir fluorescência;
CITOMETRIA DE FLUXO
- técnica usada para medir características químicas e físicas de células ou partículas
- amostra contendo células fica suspensa em fundo e injetada no citômetro de fluxo
-a luz dispersa é característica das células e de seus componentes;
CITOMETRIA DE FLUXO: .
- essa técnica necessita do uso de marcadores fluorescentes.
V ou f
INCORRETA. Apesar de o uso de marcadores fluorescentes ser comum na citometria de fluxo, este elemento não é obrigatório.
CITOMETRIA DE FLUXO
A dispersão da luz pode ser usada para medir:
a) Volume (Por dispersão frontal - FSC)
b) Granulosidade/ complexidade (Por dispersão lateral - SSC)
CITOMETRIA DE FLUXO
Indique Certo ou Errado
a citometria de fluxo identifica as células da amostra apenas por marcação com anticorpos específicos ligados a fluorocromos, através da intensidade de fluorescência
Errado
Além da fluorescência, os detectores também captam a luz dispersa à medida que o laser atravessa cada célula ou partícula.
CITOMETRIA DE FLUXO
Indique Certo ou Errado
tem como parâmetros de dispersão frontal e dispersão lateral da luz que informam respectivamente, granulosidade\complexidade celular e tamanho\forma celular.
errada.
A dispersão frontal (Forward Scatter - FSC) se relaciona ao volume celular, enquanto a dispersão lateral (Side Scatter - SSC) associa-se à granulosidade ou complexidade celular.
CROMATOGRAFIA
é uma técnica utilizada para ________________ de uma __________
separar componentes de uma mistura
CROMATOGRAFIA
Diferenças sutis no coeficiente de partição de um composto resultam em retenção diferencial na fase estacionária, afetando a separação.
V ou f
verdadeiro
CROMATOGRAFIA GASOSA (CG)
- técnica popular de cromatografia para separar compostos ou substancias voláteis;
-fase móvel: gás ex: gás Hélio.
- fase estacionária: liquido alto ponto de ebulição
CROMATOGRAFIA GASOSA (CG)
Fase móvel: transporte a mistura até a fase estacionária; Seus compostos interagem com a a fase estacionária à medida que passam.
- Sob a mesma força motriz, o tempo de retenção dos diferentes componentes difere na coluna, saindo da coluna em ordens diferentes;
CROMATOGRAFIA GASOSA (CG)
é uma vantagem da CG a alta eficiência de separação e velocidade de análise.
V ou F
Verdadeiro
CROMATOGRAFIA GASOSA (CG)
é uma desvantagem da CG a o fato dela só analisar substâncias voláteis;
V ou F
Verdadeiro.
CROMATOGRAFIA LÍQUIDA
- Técnica de separação;
- Fase móvel: líquido
- A amostra com o líquido passará por uma coluna (que é embalado por uma fase estacionária composta por partículas de formato esférico)
- Diferentes solutos reagirão com a fase estacionária causando separação dos compostos;
- HPLC: (Hight Performance Liquid chromatography): usa partículas muito pequena com pressão alta para separações analíticas de soluções;
CITOMETRIA DE FLUXO
A citometria de fluxo é um método amplamente utilizado para analisar a expressão da superfície celular e de moléculas intracelulares, caracterizando e identificando diferentes tipos de células em uma população celular heterogênea, avaliando a pureza de subpopulações isoladas e analisando o tamanho e a complexidade das células. A partir da citometria de fluxo também é possível separar populações celulares diferentes. Dessa forma, esta técnica permite a análise simultânea multiparâmetros de diferentes populações celulares.
Ao realizar uma técnica fotométrica, devemos fazer um “tubo branco” contendo apenas o reagente e água, para anular a interferência da cor inicial do reagente no tubo teste.
Verdadeiro ou falso
Verdadeiro
A Imunoturbidimetria mede a diminuição da luz ao passar por um complexo antígeno-anticorpo, ou seja, mede o quanto esta solução absorve da luz e o quanto ela deixa passar. Essa técnica, assim como a nefelometria, é usada para medir a concentração plasmática de diversas proteínas.
Certa ou errada
Certa: A turbidimetria é um método que se baseia na medida da redução da transmissão de luz em um meio, causada pela formação de partículas e consequente turvação da solução.
A Nefelometria é uma técnica frequentemente empregada para medir as concentrações de IgA, IgM e IgG e outras proteínas plasmáticas.
V ou F
Certa: a técnica de nefelometria pode ser empregada na medição de imunoglobulinas e outras proteínas plasmáticas.
A principal diferença entre nefelometria e turbidimetria é que na nefelometria a luz difundida, ou seja, aquela que atravessa a solução é medida, enquanto que na turbidimetria a luz não difundida (a absorvida) é medida.
Certa ou errada?
Certa
Turbidimetria é a medida da luz transmitida após contato com solução turva. Nefelometria é a medida da luz dispersa após contato com solução turva.
a transmissão é ___________
proporcional à concentração da solução e ______________ proporcional ao caminho ótico percorrido pela radiação. Ou seja, a transmissão ___________ quando a concentração da solução e/ou o caminho ótico percorrido aumentam.
a transmissão é inversamente proporcional à concentração da solução e inversamente proporcional ao caminho ótico percorrido pela radiação. Ou seja, a transmissão diminui quando a concentração da solução e/ou o caminho ótico percorrido aumentam.