Fixace Preparátu Flashcards
Co studuje histologie?
Tkáně
Základní typy tkání
Nervová, epitelová, svalová a pojivová
Max rozlišovací schopnost světelného mikroskopu
1500x
Typy mikroskopie (4)
Světelná (1500x, obarvené tkáně), fázová (neobarvené tkáně), fluorescenční (obarvené fluerescenčně), elektronová (dělí se transportní a skenovací)
Světelná mikroskopie (max. měřítko, co dělám s tkání)
Obarvená tkáň, 1500x, světelný mikroskop
Fázová mikroskopie (princip, co dělám s tkaní, název mikroskopu)
Na neobarvenou tkáň je vysláno světlo. Při průchodu různými strukturami má různý index lomu a rychlost. Vznikají tmavé a světlé struktury.
Mikroskop s fázovým kontrastem
Fluorescenční mikroskopie (co se dělá s tkání, název mikroskopu, technika barvení název)
Tkáň se obarví fluorescenčními barvami, Mikroskop s fluorescencí, imunohistochemie
Jak funguje sekundární imunohistochemie?
Vyrobím si primární protilátku, která se váže na protein, co chci. Pak sekundární protilátku, která se váže na tu primární a má na sobě fluorescenční barvičku
Jak si vyrobím protilátky pro imunohistochemii?
Naočkuji myšku, která mi začne produkovat protilátky. Pak jí odeberu buňky ze sleziny, které je produkují. Ty spojím s tumorovýmu buňkami. Vznikne hybridní buňka, která se hodně dělí. Z ní odeberu protilátky.
Na co se dělí elektronová mikroskopie
Transmitní a skenovací
Díky čemu dosáhnou elektronové mikroskopy většího zvětšení, než světelné?
Díky kratší vlnové délce paprsku elektronů
Jak funguje TEM?
Proud elektronů je vyslán na velmi úzce nakrájený, vysušený preparát. Tento proud snadněji projde místy s málo elektrony (ztratí míň energie). A vytvoří tím světlé a tmavé části na ploše s chemikálií, která září bíle při kontaktu s elektrony.
TEM
Transmitní elektronový mikroskop
SEM
Skenovací elektronový mikroskop
Jaký elektronový mikroskop dělá 3D a jaký 2D obrázky?
3D - skenovací
2D - transmitní
Jak funguje SEM?
Vzorek je pokryt ionty. Je na něj vyslán proud elektronů (tzv. primární). Ty uvolní (a nahradí) elektrony z iontů (tzv. sekundární). Sekundární elektrony jsou emitovány ven a zaznamenány detektorem.
Nevýhoda TEM a SEM
Zničí vzorek, nelze pracovat se živímy
Cesta vzorku z těla pod mikroskop (jednotlivé kroky) (5)
Odebrání vzorku, fixaci vzorku, zalévání do bločků, krájení, barvení preparátu
Odběr materiálu ze živého pacienta
Biopsie
Odebrání a vyhodnocení vzorku v průběhu operace
Peroperační biopsie
Odběr materiálu z mrtvého
Nekropsie
Odebrání celého orgánu/léze
Extirpace
Odebrání pouze kousku tkáně
Excize
Jak velké vzorky odebírám pro světelnou a elektronovou mikroskopii
Světelná - 1 cm^3
Elektronová - 1 mm^3
Nabodnutí části těla jehlou
Punkce
Punkce
Nabodnutí části těla jehlou
Typy punkce (3)
Punkční biopsie, aspirační biopsie, trepanobiopsie
Punkční biopsie
Nabodnutí tlustou jehlou, ve které zůstane váleček tkáně
Aspirační biopsie
Napíchnutí tenkou jehlou, odsátí buněk na cytologické vyšetření
Trepanobiopsie
Odběr kostní dřeně + kousek kosti jehlovitým nástrojem
Otisk
Přiložení sklíčka k lézi, přichycení nějakých buněk
Stěr
Volné setření buněk, gynekologie
Nástroj pro odběr vzorku endometria (děložní sliznice)
Kyretáž
Endoskopický odběr
Odštípnutí části tkáně že špatně přístupných míst (střeva, močový měchýř…)
Proč se vzorek fixuje?
Aby se nerozložil
Typy rozkladu
Hniloba a autolýza
Rozklad činností vlastních enzymů
Autolýza
Rozklad činností cizími enzymy, bakteriemi, plísněmi
Hniloba
Dělení fixačních prostředků
Fyzikální, chemické
Na jakémpak principu fungují fyzikální fixační metody
Omezení tekutosti vody a denaturace bílkovin (enzymů)
Typy fyzikálních fixačních metod (4)
Zmrazení, Lyofilizace, Mikrovlnné záření, Vysoká teplota
Fixace zmrazením, podmínky, látky
Musí být rychlá (krystalky ledu by jinak poškodili membrány)
Suchý led, tekutý dusík
Lyofilizace
Vysušení za nízké teploty, reverzibilní
Na čem se zakládají chemické fixační prostředky
Chemické tekutiny, nebo jejich výpary => šetrná denaturace bílkovin
Typy chemické fixace (2)
Perfúze, imerze
Perfúze
Vstřik fixační tekutiny do krve zvířete (to umře)
Imerze
Ponoření vzorku do fixačního roztoku
Co je to FORMOL?
1 FORMOL = 40% roztok formaldehydu
Kolika procentní roztok fomolu se používá k fixaci?
10% FORMOL (4% formaldehyd)
Fixační tekutiny s formolem (2)
Bakerova tekutina, Bouiniova (bouénova) tekutina
Bakerova tekutina
10% formol ve vodném roztoku s chloridem vápenatým (CaCl2), který zabraňuje rozpuštění lipidů
Na co je vhodná Beckerova tekutina
Průkaz lipidů a enzymů vázaných na membrány
Bouinova tekutina (bouénova) složení
25% formol ředěný kys. pikrovou (před použitím se přidává kys. octová)
Na co je vhodná a nevhodná Bouinova tekutina
Vhodná - polysacharidy
Nevhodná - krevnaté orgány (sráží krev)
Sublimát (chem. Složení)
Chlorid rtuťnatý
Sublimát
Chlorid rtuťnatý
Na co se používá sublimát, nevýhod a řešení
Jako základ fixačních tekutin, tvoří černé sraženiny, ty odstraníme jódováním, taky koroduje chirurgické nástroje
SUSA (význam názvu + co tím fixuju)
Su = sublimát, Sa = salt, kosti, zuby, chrupavky
Co je vhodné pro fixaci kostí, chrupavek a zubů?
SUSA
Zenkerova tekutina (cca chem. Složení, pro co je vhodná)
Sublimát a další látky, krevnaté orgány
Zalévání média rozpustná ve vodě (3)
Želatina, celodal, umělé pryskyřice
Výhody a nevýhody zalévacích médií rozpustných ve vodě
V - Nemusím tkáň odvodňovat (nescvrkne se)
N- Obtížnější barvení
Zalévací média nerozpustná ve vodě (4)
Parafín (nejčastější), celoidin, paraplast, umělé pryskyřice
Postup zalévání do parafínu
Odvodnění vzorku (postupným nahrazením vody etanolem), projasnění (nahrazení ethanolu intermédiem), Odstranění intermédie (58°), Prosycení parafínem (80°), tvrzení
Typy mikrotomů (kráječů)
Sáňkový, Rotační, Kryostat
Sáňkový mikrotom (co se hýbe a co krájí)
Hýbe se ostří, krájí parafín, celoidin, celodal
Rotační mikrotom
Pohybuje se tkáňového bloček, parafín
Kryostat (kdy se používá, co krájí, teplota)
Preoperační biopsie, želatina (nízké teploty -20°)
Biopsie, která odebírá kus kostní dřeně i s kouskem kosti
Trepanobiopsie
Velikost erytrocytu
7,3 mikrometru
Postup zalévání do parafínu
1) odvodnění vzestupnou alkoholovou řadou
2) Projasnění intermédiem, ve kterém se parafín rozpustí (benzen, xylen, toluen…)
3) Odstranění intermédia, prosycení parafínem 58°
4) zalití do zkvalitněného parafínu
5) tvrzení
Zkvalitněný parafín
Přefiltrovaný za vysoké teploty a přidání 3-5% včelího vosku
Název stroje na krájení preparátů
Mikrotom
Sáňkový milrotom
Pohybuje se ostří
Rotační mikrotom a jeho výhoda
Pohybuje se preparát (mohu dělat sériové krájení - více vrstev za sebou)
Název zmrazivacího mikrofonu
Kryostat
Kryostat (max. Teplota, využití)
Využívá se u Peroperační biopsie, teplota max. -20°
Co udělám už s nakrájenými preparátem?
Napnu jej na vodní hladině (40°), nalepím na sklíčko a vysuším
Čím lepím preparáty na sklíčko?
Směsí glycerinu a vaječného bílku 1:1
Typy mikrotomů
Sáňkový, Rozační a Kryostat
