Exames Parasitologicos De Fezes Flashcards
Objetivo do exame
Identificar estágios de parasitas eliminados pelas fezes, como:
- ovos de helmintos
- cistos e trofozoítos de protozoários
Colheita
- colocar as fezes em recipientes fechados
- identificar frasco com etiqueta: nome do paciente, espécie, raça, idade, data e hora da colheita
- levar imediatamente ao veterinário ou armazenar em geladeira
*conserva cistos e trofozoitos de protozoários
*evita desenvolvimento de embriões e helmintos -> larvas
Exame macroscópico
Avaliar:
- consistência das fezes
- Coloração
- presença de parasitas visíveis (proglótides de cestoides, helmintos adultos)
- presença de muco, sangue
Exame direto a fresco: princípio
Teste qualitativo para a detecção de ovos de helmintos e estágios de protozoários
Exame direto a fresco: Métodos
• Colocar uma pequena quantidade de fezes em uma lâmina de microscopia.
• Colocar uma gota de solução salina (0,85% NaCl) ou água (depende do parasita!! alguns sofrem osmose) nas fezes e misturar bem com uma espátula ou bastão.
• Cobrir com uma lamínula. A suspensão deve ter espessura fina o suficiente para permitir a passagem da luz
• Para melhorar a visualização, pode-se pingar uma solução de lugol (iodo/iodeto de potássio)
• Inspecionar a lâmina em movimentos de ida e volta
Exame direto a fresco - vantagens
• Rápido de preparar
• Se utilizado com solução salina, não causa distorções nos parasitas
• Permite visualizar trofozoítos de Trichomonas e Giardia (obrigatório o uso de solução salina)
• Útil para examinar fezes de pequenas aves e répteis (onde trematoides são comuns)
• Permite identificar quais parasitas são eliminados pelo hospedeiro
Exame direto a fresco - limitações
• Não pode ser usado para resultados quantitativos
• O método é relativamente insensível e depende do número de ovos da amostra ser alto
• A presença de muitos debris pode tornar difícil a observação e identificação os ovos/cistos
• Areia, sementes e outros debris fecais podem dificultar a deposição adequada da lamínula
• Pode requerer muito tempo para um exame adequado
Definição: Concentração por flutuação em sal
• Teste qualitativo para a detecção de ovos de nematóides e estágios de protozoários
• Conhecido como método de Willis
• Útil para ensaios preliminares visando identificar que grupos de parasitas estão presentes em uma amostra
! Importante pois concentra parasitas, pode haver maior quantidade de amostra, e vai haver menos sujeira
Concentração por flutuação em sal: Princípio
• Os ovos e/ou cistos são separados do material fecal e concentrados por uma solução de densidade maior do que a água
• Ovos “leves” (pouco densos) de helmintos e oocistos de protozoários, por terem densidade menor do que a do fluido de flutuação, tendem a subir e permanecer na superfície da solução
Por que a densidade dos ovos é uma medida importante?
Ovos “leves” (pouco densos) de helmintos e
oocistos de protozoários, por terem
densidade menor do que a do fluido de
flutuação, tendem a subir e permanecer na
superfície da solução
• Alguns livros de
Parasitologia se
referem a ovos “leves”
e ovos “pesados”. Eles
estão conceitualmente
errados!
• Deveriam dizer ovos de alta e baixa densidade, pois é a densidade (em relação à densidade do meio aquoso) que faz ou não o material flutuar
Soluções de flutuação:
• Solução saturada de sal (NaCl)
• Solução saturada de açúcar (sacarose) – solução de Sheater
• Solução de sulfato de zinco (ZnSO4)
• Solução saturada de sal (NaCl)
§ Gravidade específica: 1,18 - 1,20
§ Uso geral
§ Pode distorcer a morfologia, especialmente de trofozoítos de protozoários
! É corrosivo, tem que limpar bem depois, tomar cuidado para manter maquinaria !
! Pode usar sal de cozinha, mais barato e fácil !
• Solução saturada de açúcar (sacarose) – solução de Sheater
§ Gravidade específica – 1,20
§ Uso geral
§ Não afeta a viabilidade de ovos – recomendado para material para cultura
! Muito mais viscoso, mais difícil de manusear !
• Solução de sulfato de zinco (ZnSO4)
§ Gravidade específica: 1,18
§ Melhor solução para ovos de Fasciola
§ Reagente caro
! Mais chata de fazer, porque precisa de refratomero para saber certinho a concentração !
Técnica de Willis-Mollay: Método
Concentração por flutuação em sal
1. Colocar uma amostra de fezes em um recipiente
2. Adicionar a solução de flutuação e com o auxílio de uma espátula homogeneizar
3. Após a homogeneização, transferir a suspensão de fezes para outro frasco coando o material através de uma peneira, coador ou gaze
4. Transferir a suspensão para um tubo de ensaio e completar o volume com a solução de flutuação
5. Depositar uma lamínula sobre o menisco do líquido.
6. Aguardar cerca de 15 a 30 minutos para ocorrer a flutuação
7. Retirar e inverter a lamínula com cuidado, depositando-a sobre uma lâmina de microscopia
8. Observar a lâmina ao microscópio
• Pode-se adicionar lugol para melhorar a visualização
Densidade - medir
A densidade relativa (gravidade específica) é definida pela equação: d = m/v
E pode ser expressa em kg/m3
• 1 kg/106 cm3 = 10-6 kg/cm3 = 1 g/cm3
Flutuação em NaCl ou açúcar - vantagens
• Técnica flutua os ovos mais comuns de helmintos e oocistos de coccídias
• Soluções empregadas são baratas
• Há poucos debris para dificultar a visão dos parasitas
• Concentra os parasitas em um volume pequeno
• Permite trabalhar com amostras maiores
• Aumenta a sensibilidade diagnóstica
• Pode ser muito acelerada utilizando-se centrifugação
Flutuação em NaCl ou açúcar - limitações
• A técnica não flutua ovos de trematóides e ovos de alguns vermes chatos (ordem Pseudophyllidea – Ex. Diphyllobothrium) – mais densos
• Distorce a morfologia de cistos de Giardia
• Pode ser demorada se não for feita com centrifugação
• Não aplicável em amostras de fezes contendo gordura
• Relativamente lenta – tempo de espera para os parasitas flutuarem -> pode ser abreviada por centrifugação das amostras -> técnica de centrífugo-flutuação
Flutuação em ZnSO4 - vantagens
• Técnica recomendada para a maioria dos exames de fezes
• Flutua a maior parte dos ovos de helmintos
• Melhor método para cistos de protozoários, especialmente Giardia e para ovos de Trichuris. Na maioria dos caso recupera larvas de nematoides
Flutuação em ZnSO4 - limitações
• Não flutua ovos de alguns trematóides e vermes chatos (ordem Pseudophyllidea – Ex. Diphyllobothrium)
• Não aplicável em amostras de fezes contendo gordura
• ZnSO4 é caro e um hidrômetro deve ser usado para se fazer a solução (gravidade específica de 1,18)
Contagem de ovos: Princípio
(Técnica de McMaster)
• Método quantitativo
• Utiliza uma câmara de contagem (câmara de McMaster) que permite examinar
microscopicamente um volume conhecido de suspensão fecal
• Utiliza uma solução de flutuação para que os ovos ou cistos permaneçam aderidos à superfície superior, facilitando a contagem
Contagem de ovos
(Técnica de McMaster)
Materiais
• Balança
• Béquer
• Proveta
• Pipeta Pasteur
• Câmara de McMaster
Contagem de ovos
(Técnica de McMaster)
MÉTODOS
- Pesar 2 gramas de fezes
- Transferir para um recipiente
- Coletar solução salina saturada
• Utilizar 28 mL de solução - Adicionar a solução de flutuação
• Adicionar 28 mL de solução - Homogeneizar a suspensão
- Filtrar a suspensão de fezes
- Colher uma amostra
- Preencher a câmara de McMaster
- Aguardar o processo de flutuação
- Examinar ao microscópio
Câmara de McMaster – contagem de ovos
• Câmara para contagem de parasitas
• Possui dois compartimentos
• Cada compartimento possui uma retícula de 1,0 cm x 1,0 cm
• A altura do compartimento é de 0,15 cm
• O volume total de líquido em cada compartimento sob a retícula é de 0,15 cm3 (ml)
o.p.g.
Ovos por grama de fezes
Cálculo:
• Contar o número de ovos dentro de cada retícula quadrada
• Ignorar os ovos presentes nas áreas externas
• Usar 2 gramas de fezes para 28 ml de solução (total 30 ml)
• Cada compartimento possui 0,15 ml (total 0,3 ml)
• Multiplicar o valor total por 50
• O número resultante é o número de ovos por grama (o.p.g.) de fezes
Contagem de ovos - vantagens
• Não requer nenhum equipamento especializado
• Permite quantificar o número de parasitas eliminados pelo hospedeiro
Contagem de ovos - limitações
• A contagem pode ser demorada, especialmente se houver grande quantidade de debris.
• Não aplicável em amostras de fezes contendo gordura
• Não flutua alguns tipos de ovos.
Soluções: salina fisiológica
• 85g de NaCl
• Completar com água destilada/deionizada para 1L
Soluções - salina saturada
• Ferver 500 mL de água destilada/deionizada
• Mantendo a fervura, adicionar NaCl com agitação para dissolver
• Continuar adicionando NaCl sob agitação até não se conseguir mais dissolvê-lo
• Transferir a solução para um frasco e deixar resfriar.
• Um sedimento de NaCl deverá se formar no fundo
• A solução remanescente é saturada
Soluções: Iugol
• 2g de iodo, 4g de iodeto de potássio
• Completar com água destilada/deionizada para 100 mL
