exam 2 pratique Flashcards
Qu’est-ce qu’une banque d’ADNc, et comment est-elle utilisée pour identifier un gène d’intérêt ?
Réponse : Une banque d’ADNc est une collection d’ADN complémentaire qui représente les gènes exprimés dans une cellule à un moment donné. Elle est utilisée avec une sonde spécifique pour identifier le gène d’intérêt.
Quels types de marqueurs peuvent être utilisés pour étiqueter une sonde ?
Réponse : Fluorescent (ex. GFP), colorimétrique (ex. X-gal), radioactif (ex. P32), et lumineux (ex. TaqMan).
Qu’est-ce que la technique de Southern blot ?
Réponse : C’est une méthode pour détecter des fragments d’ADN spécifiques dans un échantillon après une électrophorèse, utilisant des sondes complémentaires pour révéler les bandes d’intérêt.
Quel est le principe du marquage aléatoire pour les sondes ?
Réponse : Il utilise des amorces courtes aléatoires pour marquer les fragments d’ADN avec des nucléotides marqués.
Qu’est-ce que la « nick translation » ?
Réponse : Une technique où des trous sont créés dans l’ADN double brin, remplis ensuite par ADN polymérase avec des nucléotides marqués.
Quels sont les avantages des sondes d’ARN par rapport aux sondes d’ADN ?
Réponse : Les sondes d’ARN sont plus stables et ne nécessitent pas de dénaturation, car elles sont déjà linéaires.
Décrivez la méthode de séquençage de Sanger.
Réponse : Elle utilise des ddNTPs pour interrompre l’élongation de brins, permettant de lire la séquence par électrophorèse.
Quelle est l’utilité du pyroséquençage ?
Réponse : C’est une méthode rapide et moderne pour séquencer les génomes, en détectant des flashs lumineux produits lors de l’incorporation de nucléotides.
Quelles sont les trois étapes principales de la PCR ?
Réponse : Dénaturation, hybridation, élongation.
Qu’est-ce que la RT-PCR et en quoi diffère-t-elle de la PCR classique ?
Réponse : La RT-PCR utilise une transcriptase inverse pour convertir l’ARN en ADN avant amplification, alors que la PCR amplifie directement l’ADN.
En quoi consiste la PCR en temps réel (Real-time PCR) ?
Réponse : Elle permet de quantifier l’ADN en temps réel en utilisant des molécules fluorescentes intercalantes.
Comment fonctionne le clonage positionnel pour cartographier un gène ?
Réponse : On utilise des fragments se chevauchant pour “marcher” le long du chromosome et identifier la position des gènes.
Quels sont les avantages de l’expression de gènes eucaryotes dans des bactéries ?
Réponse : Production en masse de protéines comme l’insuline, avec des coûts réduits et une vitesse de production élevée.
Expliquez la mutagenèse dirigée par remplacement de cassette.
Réponse : Elle consiste à remplacer une partie du plasmide par un insert spécifique pour introduire des mutations ciblées.
Quel est le principe de la mutagenèse par PCR ?
Réponse : Utiliser des amorces mutées pour introduire spécifiquement des mutations dans un fragment amplifié par PCR.
Pourquoi utilise-t-on les animaux transgéniques ?
Réponse : Pour étudier l’effet des mutations et des gènes spécifiques sur un organisme entier, souvent en utilisant des modèles comme la souris ou C. elegans.
Qu’est-ce qu’un baculovirus recombiné, et pourquoi est-il utilisé ?
Réponse : C’est un virus modifié pour contenir un gène d’intérêt, utilisé pour l’expression de protéines recombinantes.
Quelle est la différence entre les rétrovirus et les adénovirus en thérapie génique ?
Réponse : Les rétrovirus s’intègrent dans le génome, mais principalement dans les cellules en prolifération, tandis que les adénovirus ne s’intègrent pas et peuvent affecter toutes les cellules.
Quels sont les principaux éléments d’un vecteur viral utilisé en thérapie génique ?
Réponse : Séquences LTR pour l’intégration, gène d’intérêt, promoteurs et parfois des marqueurs de sélection.
En quoi consiste le système CRE/LOX et comment est-il utilisé dans la génétique animale ?
Réponse : Il permet de retirer une séquence entre deux sites loxP en utilisant l’enzyme CRE recombinase, utile pour des KO spécifiques à un tissu.
Qu’est-ce qu’une séquence PAM dans le système CRISPR ?
Réponse : Une séquence courte à côté de la cible qui permet à Cas9 de se lier et de cliver spécifiquement l’ADN étranger.
Quelle est la fonction d’un gRNA dans le système CRISPR ?
Réponse : Le gRNA guide Cas9 vers la séquence d’ADN cible pour le clivage, avec une partie variable et une partie constante pour la liaison.
Pourquoi le système CRISPR est-il préféré aux autres méthodes d’édition génomique comme TALENs ?
Réponse : CRISPR est plus rapide, précis et a un taux de succès plus élevé pour cibler des séquences spécifiques.
Quelles sont les étapes principales pour détecter des gènes sur un gel après une PCR ?
Réponse : Migration par électrophorèse, transfert sur membrane (ex. Southern blot), hybridation avec une sonde spécifique.
Qu’est-ce que la technique de transfert de type Northern ?
Réponse : Une technique similaire au Southern blot, mais utilisée pour détecter l’ARN.
Comment les Southern blots sont-ils utilisés pour comparer différentes populations génétiques ?
Réponse : En comparant les bandes d’ADN d’échantillons, on peut déterminer la similitude génétique entre populations ou espèces.
Qu’est-ce qu’un RFLP et comment est-il utilisé en génétique ?
Réponse : Le RFLP est un polymorphisme de longueur de fragments de restriction, utilisé pour la cartographie génétique et le suivi de mutations.
Quelle est l’importance des RFLP dans l’analyse génétique d’une famille ?
Réponse : Ils permettent d’identifier les marqueurs génétiques associés à des maladies héréditaires.
En quoi consiste la marche sur le chromosome ?
Réponse : Une technique pour cartographier un gène en se basant sur le chevauchement des fragments d’ADN adjacents dans une banque.
Comment les cartes de restriction sont-elles créées ?
Réponse : En utilisant des enzymes de restriction pour digérer l’ADN en fragments, puis en analysant leur longueur et position sur un gel.
Qu’est-ce qu’une carte de restriction partielle, et pourquoi l’utiliser ?
Réponse : Une carte où seule une partie des sites de restriction est coupée, utile pour identifier les sites sans couper l’ADN complet.
Qu’est-ce que la technologie Tet-On ?
Réponse : Un système d’induction de gènes dans les eucaryotes, activé par la doxycycline pour contrôler l’expression de gènes cibles.
Quel est le rôle du transactivateur dans le système Tet-On ?
Réponse : Il se lie au promoteur en présence de doxycycline pour activer la transcription du gène cible.
Pourquoi utilise-t-on la polymérase T7 dans des systèmes d’expression génique en bactéries ?
Réponse : Elle permet une expression contrôlée des protéines en n’étant activée que par un promoteur spécifique, comme celui de l’opéron lac.
Comment la production d’insuline humaine est-elle contrôlée dans une bactérie ?
Réponse : En clonant chaque chaîne dans un vecteur distinct avec B-gal, puis en utilisant le bromure de cyanogène pour cliver et libérer les chaînes d’insuline.
En quoi la séquence signal aide-t-elle à purifier la hGH produite par des bactéries ?
Réponse : Elle permet l’export de la hGH dans le milieu de culture, simplifiant la purification sans lyse cellulaire.
Qu’est-ce que le knock-out (KO) en génétique ?
Réponse : Une technique qui consiste à inactiver complètement un gène pour étudier ses effets.
Comment le KO est-il utilisé pour étudier des gènes spécifiques chez la souris ?
Réponse : En croisant des souris hétérozygotes pour obtenir des homozygotes KO afin d’observer les phénotypes associés.
En quoi un gène rapporteur est-il utile dans la création d’animaux transgéniques ?
Réponse : Il permet de vérifier si le transgène est bien exprimé, souvent par fluorescence ou un marqueur visible.
Quel est l’avantage d’utiliser un KO spécifique à un organe avec le système CRE/LOX ?
Réponse : Permet l’étude de gènes essentiels pour la survie uniquement dans un organe, en évitant les effets létaux d’un KO global.
