Enzym- og proteindiagnostikk Flashcards
Hva mener man med plasma?
Ved sentrifugering av blod får tre ulike sjikt:
- Plasma
- “Buffy coat”
- Erytrocytter
Plasma består av:
- 90% vann
- 6-8% plasmaproteiner
- 1% elektrolytter- Næringsstoffer; glukose, aminosyrer- Hormoner; kortisol, tyroksin- Avfallstoffer; urea, kreatinin- Blodgasser; O2, CO2
Proteinkonsentrasjon i plasma; 60-80 g/L
Hva er definisjonen av plasmaproteiner?
Proteiner som har sin funksjon i det ekstracellulære rom og som har en molekylmasse over ca. 45 kDa
Hvilke funksjoner har plasmaproteinene?
Opprettholde det kolloidosmotiske trykket
Transportør for lavmolekylære substanser:
- Toksiner
- Vitaminer
- Hormoner
- Sporelementer
- osv.
Koagulsjon; omdanning av fibrinogen til fibrin
Inngår i kroppens forsvarssystem:
- Proteasehemmere
- Immunoglobuliner
Hvordan bestemmes plasmaproteinenes konsentrasjon?
Bestemmes av:
1. Syntesehastigheten
2. Fordelingen mellom det intravaskulære og det ekstravaskulære rommet
3. Nedbrytning/eliminasjon
Hvordan endrer konsentrasjonen ved kroppsposisjon?
Konsentrasjonen i plasma øker!
Større effekt ses hos:
- Pasienter med høyt BT
- Pasienter med lav konsentrasjon av plasmaproteiner
- Eldre i forhold til yngre
Store individuelle forskjeller:
- Viktig med lik prøvetaking hver gang hos samme pasient for å kunne sammenligne resulateter
Hvordan vil fordelingen av plasmaproteinene se ut ved elektroforese?
Hva mener man med “Akuttfase-reaksjon”?
Hva gjør dette med plasma?
“Akuttfase-reaksjon”:
- Endringer i plasmaet proteinsmønster i forbindelse med vevsskade og inflammasjon
“Akuttfase-protein”:
- Proteiene som øker i konsentrasjon ved akutt fase”
“Negative akuttfase-protein”:
- Proteiner som faller i konsentrasjon ved akutt fase
Hvilke hormoner har effekt på plasmaproteiner?
Hvilke transportproteiner kan man f.eks. finne i plasma?
Hva transporterer de?
Albumin:
- Kalsium
- Kobber
- Sink
- Medikamenter
Retinolbindende protein:
- Vitamin A
Ceruloplasmin:
- Kobber
Haptocorrin:
- Kobalamin
Orosomucoid:
- Medikamenter
Hvilken egenskap har albumin?
Proteinet med høyest konsentrasjon i plasma
Ikke livsviktig (analbuminemi)
Opprettholder kollioidosomotisk trykk
Over 50% av albumin finnes i det ekstravaskulære rom
Produseres av hepatocytter
Hovedsakelig regulert av kolloidosmotisk trykk og sekundært av proteininntak
Betydelig resirkulering
Halveringstid 15-20 dager
Negativt “akuttfase-protein”
Viktig transportprotein:
- Kalsium
- Bilirubin
- Medikamenter
Aminokilde for vevene
Øker ved dehydrering
Reduseres ved inflammasjon, proteintap og nedsatt produksjonskapasitet, malnutrisjon (underernæring)
Hvilke årsaker kan ligge til grunne for lav albumin?
Hvilke indikasjoner er det for å måle P-albumin?
Årsaker
- Proteintap:
- Proteintapende enteropatier
- Brannskader
- Glomerulær skade, lekker ut i urin - Alvorlig leversvikt:
- Faller sent i forløpet pga. lang halveringtid og stor reservekapasitet - Alvorlig underernæring
Indikasjon
Mistanke om proteintap
Kontroll av ernæringsstatus
Vurdere leverfunksjon
Tilleggsundersøkelse ved vurdering av albuminbundne komponenter:
- Kalsium
- Medikamenter
Ødem av ukjent årsak
Hva er 𝛼1-antitrypsin?
Ved hvilke indikasjoner tar man prøver for dette?
Hemmer av flere proteaser:
- Viktigste er nøytrofil elastase
- Mangel fører til nedbrytning av elastiske fibre i lungevevet
- Polymerisering av proteinet fører til retensjon i leverceller og skade av cellene
Genetisk betinget mangel er en viktig årsak til emfysem og leversykdom
Finnes over 100 ulike mutasjoner
- Gentest finnes for de viktigste isoformene
Indikasjon for test:
- Tidlig utvikling av lungeemfysen/kronisk obstruktiv lungesykdom (30-40 årene)
- Neonatal hepatitt og juvenil cirrhose
- Leversykdom uten kjent årsak hos voksne
- Dersom 𝛼1-antitrypsin i plasma er under nedre referansegrense, bør tilstanden utredes videre med genotyping => obs! akuttfase, østrogen
Hva er haptoglobin?
Når er det indikasjon for å teste dette?
Binder fritt hemoglobin (haptein = å binde)
Komplekset elimineres raskt av monocytter og makrofager
Halveringstid:
- Haptoglobin; 3-4 dager
- Haptoglobin/hemoglobinkomplekset; 10-30 min.
Faller raskt ved intravasal hemolyse
Øker ved akuttfasereaksjon
Reduseres ved østrogenpåvirkning
Redusert syntese ved leversykdom
Indikasjon:
- Mistanke om hemolyse!
- Diff. diagnostikk ved anemi og ikterus
- OBS!: Tolkning ved samtidig akuttfasereaksjon (gir økte verdier), leversykdom eller østrogenpåvirkning (lave verdier)
Hva er ceruloplasmin?
Ved hvilken indikasjon tester man dette?
Kobberholdig protein
Hovedfunksjon er oksidasjon av Fe2+ til Fe3+
Inneholder 95% av kroppens kobber
Gjenspeiler kobbernivå fordi:
- Lav ceruloplasmin <=> lav s-kobber
- Apoceruloplasmin kortere T 1/2 enn holoceruloplasmin
Wilson sykdom:
- Lav s-Cp, lav s-Cu, høy u-Cu
- Får ikke koblet Cu til Cp i lever
- Skadelig avleiring av kobber i kroppen
Menke´s sykdom (X-bundet arv):
- Lav s-Cp, lav s-Cu, lav u-Cu
- Får ikke tatt opp Cu i tarmen
- Dødelig dersom ubehandlet
Indikasjon:
- Mistanke om forstyrrelser i kobberstoffskiftet;- Wilson- Menke
Tolkning:
- Øker ved akuttfasereaksjoner og leversykdom
- Øker ved østrogenpåvirkning
- OBS; ved utredning av tilstander hvor man forventer lave verdier
Hva er transferrin?
Produseres hovedsakelig i lever
Transport av jern
Faller ved akuttfasereaksjon
Øker ved jernmangel og østrogen
Inneholder karbohydrat (5.5%):
- Karbohydratfattig transferrin (CDT) brukes som alkoholmarkør
Indikasjon for måling:
- Vurdering av jernstatus => TIBC, transferringmetning
Ved hvilke tilstander tar man S-elektroforese?
Mistanke om:
- Myelomatose
- Waldenstrøms makroglobinemi
- Annen sykdom assosiert med M-komponent
- Kontroll av slike pasienter
Utredning av høy SR
Hvilke prøver må rekvireres ved mistanke om myelomatose?
Rekvirere serum sammen med urin protein elektroforese og/eller s-lette kjeder
- Kan finne Bence Jones i urinprøve
Kan man finne frie lette kjeder i serum?
Ja:
- Kappa og lamda
Kan kvantiteres
Øker før man kan påvise lette kjeder i urinen:
- Bence Jones proteinuria
Kappa/lamda ratio kan brukes i diagnostikk av lymfoproliferative tilstander:
- Myelomatose
- AL-amyeloidose
Hvordan er det med proteinutskillese i urinen?
Proteiner < 40 kDa passerer normalt filteret i glomeruli. > 60 kDa holdes tilbake
- Reabsorberes normalt i tubulscellene
Ved glomerulær skade:
- Glomerulær proteinuri; albumin og transferrin
- “Plasmalikt” ved stor skade
Tubulær skade:
- Småmolekylære proteiner i alfasonen (elektroforese)
- Redusert reabsorbsjon av proteiner som finnes normalt
Elektroforese av urin ved mistanke om “Bence Jones proteinuri” => frie lette imunnoglobuliner i urin
Hvilke hovedmål har man innenfor enzymanalyser i klinisk kjemi?
- Organdiagnostikk; finne hvilket målorgan eller organsystem som er sykt
- Å gi inntrykk av sykdommens omfang eller grad
- Å følge utviklingen av en sykdom
Utvalgt for å gi diagnostiske opplysninger
- Ikke nødvendigvis nøkkelenzymer i metabolismen
Hvor kan man lokalisere enzymer?
Intracellulært i cytosol, mitokondrier, ER, membranbundet
Finnes stort sett i alle kroppens celler
- Katalyserer generelle intracellulære reaksjoner
Mengden varierer sterkt fra organ til organ
- Organ kan ha sitt spesifikke enzymmønster
- Enzymene har ulik organsspesifisitet
Hva indikerer at enzymene finnes i plasma?
Økning av intracellulære enzymer i plasma skyldes:
- Iskemi; muskel, lever osv.
- Mekanisk skade; kontusjon, brannskade
- Toksisk skade; lever
- Inflammasjon
Hvordan analyser man enzymene i prøver?
Massekonsentrasjonene er ofte for liten i plasma til at den kan måles direkte
Benytter enzymets katalytiske funksjon og måler enzymaktivitet
Enhet er ofte U/L:
- 1 U er den enzymaktiviteten som omdanner et 𝜇mol substrat per minutt
Ikke nødvendigvis sammenlignbare mellom laboratorier
Hvordan er utslippsmønsteret til enzymer?
Enzymer i cytosol slippes først ut og i størst grad ved akutt cellesskade:
- F.eks. ALAT
Utslipp av mitokondrielle enzymer starter senere (delay) og utslipp er oftest lavere:
- F.eks. ASAT
Økning i mitokondrielle enzymer taler derfor for en mer uttalt skade
Fraktes via lymfen eller passerer kapillærene (delay)
Hva er isoenzymer?
Enzymer med felles katalytisk funksjo0n, men moderate strukturelle forskjeller
Sammensetningen av ulike isoenzymer kan være forskjellig i ulike organ, f.eks.:
- Laktat dehydrogenase; 5 forskjellige isoenzymer
- ALP; lever, skjelett, placenta
Hva er problemet med makroenzymer?
Kan gi tolkningstrøbbel!
F.eks.:
- Type 1; Enzymet binder seg til autologe antistoffer, oftest IgG/IgA
- Type 2; Selvpolymerisering eller bindes til fremmede substander (medikamenter)
- Konsekvens av dette; forlenget halveringstid
Kan gjøre at man måler forhøyet aktivitet i plasma, uten noen aktuell patologi
- Mulig forklaring på tilfeldig oppdaget forhøyede verdier; Amylase, CK, GT
Hva kan årsaker være til økt enzymaktivitet i plasma?
Celleskade:
- Utsvømming av celleenzymer til ekstracellulærvæske
Økt produksjon i uendret cellepopulasjon:
- Alkalisk fosfatase (ALP) ved gallegangsokklusjon
- GT ved bruk av barbiturater
- Økt LD-aktivitet ved visse kreftformer; økt LD-aktivitet per gram i forhold til friskt vev
Økt antall enzymproduserende celler
Redusert eliminasjon:
- Eks. amylase ved nyresvikt
- Mulig ALP og GT ved gallegangsokklusjon
Hvordan er forholdet mellom ALAT/ASAT?
Ved hvilke tilstander kan ASAT/ALAT stige?
Akutt leverskade stigning x 500:
- Iskemisk
- Toksisk
- Traumatisk
Stigning x 20:
- Akutte virale hepatitter
- Medikamentindusert skade
Stingin 3-4x:
- Kronisk hepatitt
- Cirrhose
- Fedme eller alkohol (oftest)
Moderat økning ved gallestuvning
- Oftest normal ved cholecystitt
Lett økning av ASAT ved primære muskelsykdommer:
- Muskeldystrofier
- Dermatomyositt
I hvilke tilfeller er ALAT høyere enn ASAT og vica versa?
ALAT > ASAT:
- Vanligvis ved akutt leverskade
- Kronisk leversykdom uten uttalt leverfibrose
ALAT < ASAT
- Lervercirrhose uansett årsak
- Alkoholrelatert leversykdom
- Wilsons sykdom
Hva er LD?
Hva kan det brukes til?
Laktat dehydrogenase (LD)
Finnes i de fleste av kroppens celler
Katalyserer reaksjonen mellom laktat og pyruvat i cellene
Maks plasmaaktivitet ca. 2-3 døgn etter akutt celleskade
- Stigningen er ofte proporsjonal med størrelsen av skaden
Brukes ved:
- Anemidiagnostikk
- Leukemidiagnostikk
- Kreft; tumormarkør
5 ulike isoenzymer; ulik halveringstid
OBS! Hemolyse ved prøvetaking
Hva er ALP?
Hva brukes det til?
Alkaliske fosfataser (ALP)
Finnes i knokler, lever/galleganger, tynntarm, nyre, placenta:
- Isoenzymer
Lever/galleveissykdom:
- Gallestuvning
Skjelettsykdom og beinvekst:
- Økt osteoblastaktivitet
- Øker ikke ved aldersosteoporose
Økning i siste trimester av svangerskapet
Hva er CK?
Hva brukes det til?
Kreatininkinase (CK)
Finnes i skjelettmuskulatur, hjerne og hjerte
Dimer, tre forskjellige isoenzymer:
- CK-MM
- CK-BB
- CK-MB
Økt aktivitet ved:
- Muskulære lidelser
- Myskeldystrofi; Duchenne
- Øker også ved asymptomaptisk bærertilstand
- Akutt muskelskade; Rhabdomyolyse
- Endokrin myopati; hypotyreose
CK-MB tidligere brukt i diagnostikk av hjerteinfarkt:
- CK-MB kan måle i massekonsentrasjon; hjerteinfarkt
Hva er 𝛾-GT?
𝛾-Glutamyl-transpeptidase (𝛾-GT)
Relativt leverspesifikt:
- Finnes og i nyre og pankreas
Membranbundet glykoproteinenzym
Øker ved gallestase
Induksjon ved antiepileptika
Indikasjon:
- Mistanke om kolestatisk leversykdom
- Diff. diagnostikk ved økt s-ALP
- Vurder leverpåvirkning ved overvekt og DM
“Gin and tonic”:
- Alkoholmarkør
- Ca. 52% av alkoholavhengige har økte verider
- Øker selv om det ikke er alkoholisk leverskade (induksjon)
Hva er amylase?
Hva brukes det til?
Spalter polysakkarider til disakkarider
Pankreasamylase:
- Relativt pankreasspesifikt
Spyttamylase:
- Spyttkjertler
- Lunger
- Testis
- Ovarier og eggledere
Normalt 50/50 av hvert isoenzym i plasma
Fjernes hovedsakelig via nyrene pga. lav molekylvekt
Økte verdier ved:
- Betennelse i pankreas og spyttkjertler
- Redusert nyrefunksjon
Makroamylasemi:
- Danner kompleks med annet plasmaprotein; 1% av befolkningen
- Måle amylaseaktivitet i urin for diff. diagnose
Hva er lipase?
Hva brukes det til?
Hydrolyserer triglyserider til monoglyserider, glyserol og fettsyrer
Øker ved akutt pankreatitt
Filtreres i glomeruli og reabsorberes i tubuli:
- Normalt skal ikke lipase påvises i urin
Holder seg høy lengre enn amylase
Gir omtrent samme diagnostiske info som amylase
