DNA recombinante Flashcards
¿Qué es lo que se identifica en enfermedades?
La presencia de genoma viral o bacteriano.
¿Qué tipo de DNA se utiliza actualmente en la técnica “finger print”?
Se utiliza DNA mitocondrial.
¿Qué hace el chip de DNA o DNA microarray?
Permite identificar los genes que se están expresando en un momento definido del desarrollo de un organismo, o de su estado fisiológico o patológico.
3 vectores capaces de autoreplicarse:
Plásmido, fago y cromosoma.
¿Cuáles son los 2 ciclos vitales que se pueden producir cuando un fago infecta una bacteria?
1) Ciclo lítico:
El fago comienza a multiplicarse pero libera enzimas que destruyen al bacterio. No es útil ya que necesita que el bacterio siga vivo.
2) Ciclo lisogénico:
El fago no se multiplica y queda en su genoma, es mucho más útil ya que permite la replicación de su vector recombinante.
¿Cómo se logra separar el RNAm de los demás RNA?
Se incorpora poli T en unas columnas específicas ya que está va unirse solamente a los RNAm que tienen poli A, mientras que el resto de los RNA se elimina.
¿Cómo se logra que de un híbrido de DNA y RNA, sólo quede el DNA?
Este híbrido se trata con un álcali, quedando solo el DNA y desapareciendo el RNA.
¿Qué es el PCR?
La reacción en cadena de polimerasa o PCR es un procedimiento en el cual se multiplica el DNA mediante múltiples polimerizaciones del DNA con Taq polimerasa (es resistente a la temperatura) y en ciclos de denaturación y renaturación.
¿Cómo se llama el proceso cuando se incorpora el vector recombinante a un bacterio huésped?
Transformación.
¿Cuál es el procedimiento para un southern o northern blot?
Se realiza la electroforesis que puede ser de DNA o RNA, se produce la separación, de transfiere todo a un papel de nitrocelulosa, se incorporan probes o sondas y se identificase los trozos de DNA o RNA con una autorradiografia o con probes fluorescentes.
¿Cuál es el procedimiento para una transferencia Western?
Se hace con proteínas, anticuerpos específicos para las proteínas que se quiere identificar.
Se separan las proteínas, se produce migración, se transfiere al filtro de nitrocelulosa, se forman bandas de proteína y se agrega un anticuerpo específico o para las proteínas que se quieren identificar.
Luego esto de revela mediante la detección de fluorescencia (el anticuerpo está unido a sustancia fluorescentes).
¿Cómo funciona el DNA finger print // Huella de DNA?
Detecta el polimorfismo presente entre las personas que se quieran estudiar mediante endonucleasas de restricción que producirán diferentes cortes en el DNA en diferentes individuos de acuerdo al grado de polimorfismo que posean.
¿Cuál es el método más usado para introducir genes en células vegetales?
A través de plasmidos y la transformación de Agrobacterium tumefaciens, precisamente gracias a su plásmido Ti, que es un segmento de DNA que se puede modificar.
Esto ha generado, por ejemplo, la creación del arroz dorado o la resistencia de plantas de tabaco a plagas por inserción de cotiledones de papa.
¿Que se hace en la terapia ex vivo?
Se hace un biopsia, sacándose un trozo de tejido el cual se infecta con un virus genéticamente modificado para estimular o bloquear la expresión de un gen y finalmente se inserta nuevamente en el organismo.
Su gran desventaja es que las células tratadas mueren en el organismo por su vida media y las células no tratadas, no expresan el cambio realizado.
¿Qué se hace en la terapia in vivo?
Es experimental y trata de modificar la expresión de un gen, estimulando o bloqueando su expresión mediante la inyección de un virus modificado o liposomas.
(Los virus son más adecuados).
