DNA isolatie Flashcards
Wat zijn 5 isolatiemethoden?
1 Chelex (klassieke methode)
2 Fenol-Chloroform, organische extractie
3 FTA papier
4. Solid Phase Extraction
5. Geautomatiseerd
Wat is belangrijk voor de verdere analyse van DNA?
Hoeveelheid, zuiverheid, vaardig en goed opgeleid personeel.
In welke stappen wordt DNA isolatie opgedeeld?
- Verstoring van het celmembraan –> Cellyse
- Denaturatie van proteïnen
- DNA scheiding van gedenatureerde proteïnen en andere cellulaire componenten
- Elutie van het DNA
Hoe werkt isolatie met SPE?
- Lyseren mbv proteinase K en buffer (breken membraan en proteïnen als DNAse)
- DNA denatureren mbv temperatuur (zodat het kan binden)
- Nucleïnezuur adsorbeert aan silica korrels in de aanwezigheid van hoge concentraties chaotrope zouten en een neutrale of zure pH.
Wat doet chaotroop zout?
Verstoort waterstofbruggen in waterige oplossing waardoor gedenatureerd DNA meer thermostabiel is dan wanneer het gevouwen is. –> Zorgt er dus voor dat het DNA kan binden aan de silica.
SPE, Waarom wordt er een buffer toegevoegd en gecentrifugeerd?
Om onzuiverheden weg te wassen.
SPE, wat gebeurd er door een basische buffer toe te voegen zonder zout?
Dan laat het DNA weer los en kan het ge-elueerd worden.
Waarom is het lastig om DNA te isoleren bij sperma en haar?
Disulfide bruggen beschermen de chromatine waardoor DNA extractie lastig is.
Wat wordt gedaan om het isoleren van DNA in sperma en haar toch te doen?
DTT toegevoegd, hierdoor worden de Disulfide bruggen afgebroken.
Waarom is het lastig om DNA te isoleren uit botten? En hoe wordt dit verhelpt?
Door hydroxy-apatiet, dit heeft hoge affiniteit met DNA. Door het sample te verpulveren en te ontkalken.
Hoe kun je makkelijke het vrouwelijk DNA van het mannelijke DNA scheiden in een mengsel?
Spermacellen worden alleen gelyseerd bij aanwezigheid van DTT.
