Capillaire Elektroforese Flashcards
Hoe lang duurt DNA analyse van A tot Z?
Hangt af van de prioriteit. Kan 2 dagen tot 5 weken duren.
Waarvoor wordt capillaire elektroforese gebruikt?
Fragment analyse (stukjes DNA door bijv. PCR)
Hoe werkt capillaire elektroforese?
De gel zit in een soort buis met aan de ene kant een positieve pool en de andere kant een negatieve pool.
Bevat een open gedeelte waar de laser op schijnt.
Fragmenten lopen door de buis en de detector meet of er een kleurtje langs komt.
Wat zijn de voordelen van capillaire elektroforese?
- Hoge precisie
- Hoge resolutie (scheiding op <1bp verschil)
- Detectie ook van gelabelde fragmenten
- Automatisering (dus sneller en op lange duur goedkoper)
Waarom is een capillair van glas gemaakt?
Omdat glas inert is, reageert niet met het DNA.
Waarom is het polymeer lineair?
Het moet overal even sterk binden
Waar zorgt de buffer TAPS voor?
- stabiele pH bij hoge temperaturen (lage PH = minder fluorescentie)
- lagere viscositeit (Kan DNA er makkelijk doorheen)
- formamide helpen
Wat doet formamide?
Houdt DNA enkelstrengs
Wat doet de elektro-osmostische flow?
Zout + glas zorgen voor een tegengestelde osmotische flow. Houdt de DNA migratie een beetje tegen, waardoor er een betere scheiding ontstaat.
Wat is luminescentie?
Het spontaan afgeven van straling bij het terugvallen van een molecule van een aangeslagen naar de grondtoestand
Welke soorten luminescentie zijn er?
Chemoluminescentie – excitatie veroorzaakt door chemische reactie
Fotoluminescentie – excitatie veroorzaakt door de absorptie van straling
Waaruit bestaat fotoluminescentie?
1 Fosforescentie
– emissie van straling (licht) duurt nog een tijdje nadat excitatie gestopt is
2 Fluorescentie
emissie van straling (licht) stopt wanneer excitatie stopt
Hoe heet het molecuul dat een foton uitzend?
Fluorfoor
Waarvoor staat RFU?
Random Fluorescence Units.
Wat heeft invloed op de resolutie/scheiding van pieken?
Capillair lengte
Concentratie polymeer
Voltage (1,5kV
