Diagnostics de mycoses

Question 1

Prélèvement

Answer 1

Le prélèvement est différent en fonction de la pathologie.

Question 2

Examen direct

Answer 2

Examen microscopique du prélèvement effectué (on le met entre lame et lamelle et on observe
Objectif: mise en évidence d’éléments fongiques
Peut se faire:
- dans l’eau physiologique (à frais)
- avec de la potasse à 20% en cas de tissus épais (agent éclaircissant)
- avec une coloration:
coloration extemporanée (noir chlorazol)
coloration permanente (MGG, bleu de toluidine, Gomori-Grocott)
- utilisation avec un agent fluorescent (Uvibio, Calcofluor)

Ne pas négligez, permet d’orienter le diagnostic

Question 3

Culture

Answer 3

Pour optimiser les chances d’identifier un champignon, on va ensemencer des milieux permettant la pousse du champi. Le but est d’isoler les agents fongiques présents dans un prélèvement pour l’identification.
Milieu de référence en mycologie médicale = milieu de Sabouraud (exam)
 additionné de gentamicine et/ou chloramphénicol pour inhiber la pousse des bactéries
 ajout possible de cycloheximide (Actidione®) qui inhibe la pousse de certains champignons
- empêche les contaminations par certaines moisissures (utile si on ensemence un ongle de pied tout pourri : enlève les moisissures mais pas notre champi d’intérêt)
- peut aussi servir de critère d’identification
Existence d’autres milieux: chromogènes (intéressant : gélose avec agents chimiques qui selon l’espèce de la levure elles vont avoir une couleur différente donc permet d’avoir une idée de l’espèce et savoir s’il y en a plusieurs dans un même prélèvement), malt, BHI, borelli, PDA

Question 4

Identification

Answer 4

C’est la caractérisation du genre et de l’espèce du champignon.
Objectif: déterminer si ce champignon peut être impliqué dans les symptômes observés ou s’ il s’agit juste d’un contaminant de l’air
Les techniques sont variables selon le champignon observé.
1- Identification des levures
-MALDI-TOF +++ (Laser et spectrométrie de masse)
-Techniques préhistoriques : galerie d’assimilation (API) / fermentation des sucres = auxanogrammes/ zymogrammes
-Tests spécifiques : blastèse, chlamydosporulation, uréase
2- Identification des filamenteux
 Morphologique
- Macroscopie (culture)
- Microscopie (technique du “drapeau”, en bleu coton) : caractérisation des filaments et des organes formant les spores
cherche aspect filaments et organes de fructification (ceux qui forment les spores)
 MALDI-TOF(marche pas toujours)
Vrai technique de référence: séquençage de l’ADN

Question 5

Autres techniques diagnostiques

Answer 5

Diagnostic direct
Détection de marqueurs circulants (détection du microorganisme ou d’un de ses constituants)
- Antigène aspergillaire : galactomannane
- Antigène cryptococcique : glucuronoxylomannane
- Antigène de Candida : manande
- Antigène Candida : mannane
- Beta-1.3-glucane : marqueur panfongique (ou presque)
Détection de l’ADN
- PCR visant certains agents fongiques
B) Diagnostic indirect
Sérologie : peu utilisé en Mycologie Médicale (à part pour Aspergillus, Histoplasma,..)