Cours 5 cohen Flashcards
Quel est le génome de influenza
sb polarité négative
Influenza affecte quelle cellule
épithéliale, pas restrainte à une espèce
Comment se transmet influenza
grippe/ pneumonie par aérosol
Comment classifie-t-on influenza
Dérivé: Mutation ,lors de réplication (polymérase virus beaucoup d’erreur cause +++ mutation ponctuelle, même souche, mais légère variation fonctionnelle, nouvelle souche)
Saut: Co-infection mixte de deux souches différente dans une cellule cible et vont se répliquer en même temps et puisque orthom. est segmenté, RÉASSORTIMENT GÉNÉTIQUE mélange de segment lors de l’ENCAPSIDATION… créer une nouvelle sous-type HA ou NA, pas toujours infectieuse pour humain
Type… selon le réservoir et leur mécanisme d’infection
Nommez 3 types d’influenza
1) Influenza A:
- infecte l’humain + mammifères
- Pathogène le + sérieux pour l’humain – responsable des PANDÉMIES
2) Influenza B:
- infecte humain - atteintes respiratoires sévères surtout chez les personnes âgées
3) Influenza C infecte humain + porc. Infection assez commune chez les enfants (peu sévère)
Protéines importantes (7) chez influenza et leur fonction
Protéines de surface:
1) Hemagglutinine (HA) – trimère lie acide sialique, majeur partie de la surface glycoprotéique, fusion à faible pH
2) Neuraminidase (NA) – tétramère, clive acide sialique, glyprotéine de surface
3) M2 – tétramère capable de
former un canal ionique
Autres protéines virales:
4) M1 : Protéine de la matrice (enveloppe lipidique)
5) NP : nucleoprotéine (en complexe avec les segments d’ARNs = Complexe ribonucléo-protéique (RNP), rôle dans le switch ARNm ?? REVOIR
6) Polymérase virale composée de 3 sous-u (PA, PB1 and PB2)
7) NS1 et 2 : Protéines
non-structurales
Combien de segments ont chacun des types d’influenza
A: 8
B: 8
C:7 Pas NA, car HEF (glycoprotéine surface, permet aussi fusion et destruction récepteur cellulaire par acide sialique)
Que peut-on dire sur la réplication d’influenza
Influenza est un ARN négatif… Habituellement, virus ARN négatif ne vont pas dans le noyau , mais lui oui, car 2 étapes
(hémagglutinine vont reconnaître récepteur de la cellule et endocytosé dans cellule… canaux ionique par M2 va faire pompe proton qui va acidifier le milieu permettant la décapsidation
… synthèse ARN messager positive par transcriptase, et besoin de faire des réplication positive du génome pour pouvoir faire ++++ de génome négatif avec réplicase besoin polymérase du virus au niveau du noyau
Aussi… niveau réplicase PB1 et Pa niveau de polymérase requis alors que l’autre non (PB2)??
Nommez des inhibiteurs du cycle d’infection de l’influenza
Inhibiteur de M2 (interfère avec décapsidation):
Amantadine
Inhibiteur de la NA (inhibe la relâche et dissémination virale:
Oseltamivir: Tamifu
Quel caractéristique de influenza A lui permet le déclenchement d’épidémie
1) Type A infectent un spectre très large de mammifères
2) Propriétés génétiques du virus influenza
3) Infection de population naïve sur le plan immunologique
Nommez 3 mode de persistances du type A de influenza et leur caractéristique
1) Présence réservoir naturel alimente l’introduction de nouveau sous-type chez l’humain
•Réservoir naturel principal = oiseaux aquatiques L’infection généralement asymptomatique chez ces espèces
•Le porc = intermédiaire réassortiment génétique vu susceptible à l’infection par les virus infectant les humains et les oiseaux – danger de l’élevage intensif de porcs et de volailles à proximité
•Possibilité de transmission directe des oiseaux à l’humain (H1N1)
2) L’absence de fidélité lors de la réplication virale alimente la variation génétique – permet l’adaptation à l’hôte et l’évasion immunitaire puisque l’immunité acquise est sous-type+ souche spécifique
3) La transmission entre hôte est extrêmement efficace
Nommez les applications des vecteurs viraux
1) Production de protéines recombinantes
2) Vaccins: transférer un antigène pour stimuler une réponse immunitaire protectrice – plus sécuritaire
3) Applications de recherche pour des études fonctionnelles
- Expression d’allèles de type sauvage ou mutantes,
- Expression d’ARNs d’interférence
- Expression du système CRISPR-Cas9 pour faire de l’édition du génome
4) Thérapie génique : transférer des gènes dans des cellules ou des tissues d’un individu pour traiter une maladie
Expliquez le concept de la thérapie génique
1) Consiste à faire pénétrer des gènes dans les cellules ou les tissus d’un individu
pour traiter une maladie
2) Vise à remplacer ou
complémenter un allèle
mutant défectueux par un
allèle fonctionnel ou à sur-exprimer ou inhiber une
protéine dont l’activité aurait un impact thérapeutique
Approche ex vivo vs in
vivo*
Énumérez les propriétés du vecteur viral idéal
1) Production concentrations importantes (titre infectieux) transduire le plus de cellules possibles
2) Reproductibilité et facilité de production sans risque de recombinaison
3) Possibilité d’insérer des transgènes de grande taille
4) Capacité de transduire des cellules souches, des cellules différenciées ou en division
5) Capacité de cibler à un type cellulaire spécifique
6) Capacité de s’intégrer à des sites spécifiques dans le génome de l’hôte ou de se maintenir de manière stable comme épisome
7) Ne pas contenir des composantes qui induisent une réponse immunitaire délétère
Expliquez le vecteur de l’adénovirus de 1e génération
1) Génome sauvage = L … Vecteur = délétion de E1A et E1B et nouvelle insertion avec protéine d’intérêt…
2) Vecteur induit protéine structural adénovirus normal..
3) 1e lignée cellule (lignée complémentaire cellulaire) devra produire les protéine E1 (essentielle pour la réplication) pour être capable de faire peudo particule viral contenant le vecteur.
4) Infection des cellules comme la normal mais production de protéine d’intérêt dans cellule cible.
5) Sans E1 dans vecteur, pas de synthèse de nouveaux virus… Pourquoi délétion de départ de E1… vecteur doit pas formé de virus sinon lyse des cellules cibles (non voulu, car on veut observé gène d’intérêt/ protéine d’intérêt), mais mis dans cellule 1e ligne pour former les pseudo virus.
Nommez les avantages et inconvénients du vecteur de l’adénovirus 1e génération
Avantage:
1) Long ADN
2) Titres élevés de virus provenant de la cellule cible
3) Très efficace vont exprimé gène d’intérêt
Désavantage:
1) spécifique
2) Les virus provoque Rx inflammatoire… baisse de virus par SI
3) Quand cellule se divise.. transitoire… on perd le vecteur
Expliquez le vecteur de l’adénovirus de 3e génération
1) 2 vecteurs:
V#1 (SPI) Gène d’intérêt (GUTLESS)+ ADN humain (remplissage)
V#2 Helper (SPI et LOXP) Protéine structurale virale + délété E1 et E3
- SPI = séquence d’encapsidation dans particule*
- LOXP dans vecteur helper… par recombinase CRE détecte LOXP et enlève SPI par recombinaison = pas de réplication dans structure… juste pour former capside…
Vecteur GUTLESS on pas LOXP dont pas enlever SPI… permet encapsidation GUTLESS uniquement… Helper sert juste à fournir les structure protéique de capside viral
Nommez les avantages et désavantages des vecteurs de 3e génération avec l’adénovirus
Avantages:
1) Long ADN
2) Pas de gène viraux
(Diminue l’immunogénécité) 3) Expression prolongée car peu de reconnaissance par SI
Désavantage:
Production limité
Expliquez le vecteur AAV de l’adénovirus
1) 3 vecteurs:
V#1 (PSI): Protéine d’intérêt
V#2: Gène pour CAP (capside) et REP (réplication)
V#3: Vecteur de structure de Adéno
2) intégration sur chromo 19
Nommez les avantages et désavantages des vecteurs AAV
Avantages: 1) Aucun gènes viraux 2) Potentiel de mutation par insertion faible 3) Expression persistante et stable 4) Transduction de cellules en arrêt de division 5) Non pathogène
• Désavantages 1) Limite de taille du transgène, 4.9 kb 2) Production complexe et titre viraux faible
Expliquez le vecteur des rétrovirus simple
3 vecteurs
V#1 : transgène et PSI
V#2: GAG POL + promo
V#3: ENV + promo
Intégration au génome proche promoteur
Encapsulation avec transcriptase inverse et intégrase de gène d’intérêt transgène dans capside virale
Le seule à transduire durant la division cellulaire
Nommez les avantages et désavantages du vecteur du rétrovirus simple
Avantages :
–Efficacité de transduction élevée
–Sont capables de s’intégrer dans le génome de la cellule cible
–Expression persistante du transgène
–Tous les gènes viraux sont absents
–Peut insérer jusqu’à 8-9 Kb de matériel génétique
–Tropisme cellulaire manipulable par pseudotypage avec des glycoprotéines d’Env ayant des spécificités cellulaires distinctes
Désavantages
–Titre viraux faibles
–Ne peuvent transduire des cellules qui ne se divisent pas
–Potentiel oncogène; effet mutagène potentiel dû à l’intégration (activation de proto-oncogène)
Expliquez les vecteurs des lentivirus (rétrovirus complexe)
Même principe et gène que rétrovirus simple, mais avec avantages additionnels:
1) Transduction efficace de cellules en arrêt de division ou différentiées
2) Transduction efficace de cellules souches
3) Probabilité d’oncogenèse suite à l’intégration du vecteur plus faible
4) Titre viraux modérés
