Cours 5

Question 1

donnez les microscopies “nanoscopies”? brièvement

Question 2

quel est la résolution maximale de la microscopie optique?
qu’est ce qui limite la microscopie optique?
quelle est la résolution de la nanoscopie
STED?
PALM/STORM?

Question 3

qu’est ce que la microscopie STORM/PALM? nom complet, principe?

Question 4

quels sont les limitations et avantages du STORM?

si pas sur du nombre regarde correction

Answer 4

limitations (5)
- mol photoactivable trop chers
- pas d'études dynamiques
- algorithme de détermination du centre de fluo peut faires des fautes
- acquisition trop longue
- bruit de fond (autofluo de mol bio)
avantages (3)
- la résolution nanométrique
- ne cramme pas l'echantillons 
- image en cellule vivante

Question 5

qu’est-ce que le STED? principe?

avantages et inconvénients?

Answer 5

avantages :
cinetique, 3D, cellule vivante, sans marquage.
inconvénients:
on fait une fois l’image puis échantillion grillé=> à jeter.
- le filtre de deplession est trop complexe et la manipulation en générale.

Question 6

qu’est ce que la FCS?
les types de correlation spectroscopy?
- qu’est ce qu’on peut étudier avec? (number on answer)

Answer 6

5

Question 7

qu’est ce que la diffusion de mie ?

Answer 7

décrivant la diffusion élastique – c’est-à-dire sans changement de longueur d’onde – d’une onde électromagnétique plane par une particule sphérique caractérisée par son diamètre et son indice de réfraction complexe.
les nanoparticules d’or

Question 8

queles sont les deux informations les plus importanes tirées à partir de la courbe de correlation?
(regarde pas la réponse avant question suivante)

Question 9

-comment peut on déterminer la concentration molaire de notre échantillon? (la loi)
- loi de coefficient de diffusion (deux lois) (son unité)
-

Question 10

qu’est ce qu’on observe en fcs?

regarde hint

Answer 10

3

Question 11

comment peut on augmenter la probabilité de l’état triplet?

Question 12

donnez l’interval de concetration oplimale de l’échantillon dans le volume focal pour la FCS?

Answer 12

10-100nm

Question 13

comment appelle on la FCS avec 2 colorants différents

Answer 13

correlation croisée

Question 14

qu’est ce que la microscopie à champ proche?

donnez les types de microscopies à champ proche (noms et une phrase )

Answer 14

est un type de microscope à sonde locale1 qui permet d'imager des objets à partir de la détection des ondes évanescentes confinées au voisinage de leur surface (détection en champ proche optique).
2 classes (1classe = 1technique; 2classe=2techniques)

Question 15

qu'est ce que le tirf? principe?
principaux éléments du montage?
résolution?
utilisation?
comment est l'objectif du TIRF?

Answer 15

TIRF =n total internal reflexion fluorescence.
c’est une microscopie à champ proche qui est bassée sur la loi de snell descartes. une lumière d’excitation est envoyée sur l’échantillon avec un angle i donnée de manière à avoir une reflexion totale du fascenau incident. le faisceau pénétre legerement et induit une excitation locale avent qu’il soit complétement refléchie. l’onde locale induite est evanhescente (maximale en approche de la surface et minimale aux extrimitées).
on l’utilise pour imager une 100n de nm près de la surface de l’échantillon résolution axiale = 105nm
objectif :
-objectif à prisme ou prisme aligné à l’extérieur de l’objectif.
-comme l’angle est très ouvert on utilise un objectif à grande ouverture numérique.

Question 16

pour chaque microscopie, déterminez le :
excitation (qu'est ce qu'on excite)
détection
section
utilisation 
pour :
champ large; confocale; 2photons; FLIM/FRET; FRAP; TIRF

Question 17

donnez pour le TIRF:

avantages/ inconvénients, et applications

Answer 17

avantages :
- coupe optique fine (150-200 nm)
- résolution en Z élevé (d = 105 nm)
- pas d’effet de photoblanchiment sur toute l’echantillion car focalisée sur un seul point à la fois
- possibilité de faire de l’étude cinétique
- étude de l’adhérence cellulaire, interactions, cytosquelette
- études dynamiques et cinétiques
- bon rapport signal / bruit car on collecte le signal que sur le volume focal
inconvénient:
- section est de 100 nm donc pas d’accés à la profondeur
- logiciel et détecteurs complexes pour faire l’étude cinetique.
- faut marquer par un fluorophore uniforme
- faut gérer l’adhérence des cellules aux parois.

Question 18

qu’est-ce que AFM et STM?
points communs entre les deux?
utilisées pour voir quoi?

Answer 18

• microscopie electronique à force atomique :
  L’AFM permet d’analyser une surface point par point grâce à un balayage par une sonde. Cette dernière est constituée d’une pointe très fine, positionnée à l’extrémité d’un micro-levier flexible. Ce type de microscopie fonctionne en mesurant l’interaction attractive ou répulsive entre les atomes constituant la pointe nanométrique et les atomes surfaciques d’un échantillon. Quand la pointe est à proximité d’une surface, les forces d’interactions entre la pointe et l’échantillon entraînent une déviation du levier qui suit la loi de Hooke.

L’analyse de la déviation du levier, à l’aide d’un laser, permet à la fois de déterminer le parcours exact de la pointe et de mesurer les forces d’interactions entre cette dernière et l’échantillon.

• microscopie à effet tunnel STM:
  Le microscope à effet tunnel est un microscope à champ proche qui repose sur « l’effet tunnel »
  le microscope à effet tunnel est composé d’une pointe (aussi appelée « palpeur ») qui permet de « scanner » la surface d’un objet. La hauteur de cette pointe est réglée par un ordinateur afin de maintenir un courant constant. C’est l’effet tunnel qui permet le passage d’électrons entre la surface de l’objet et la pointe. Quand celle-ci est plus proche d’un relief, le courant augmente. Quand au contraire la pointe survole un creux, le courant diminue. Le suivi de ce courant permet d’établir le profil de la surface.
  poits communs :
  utilisation de points
  m a champ proche
  topographie de surface

Question 19

qu’est ce qu’on mesure en STM?
quels sont les modes de fonctionnemen? (hint on answer)
- appareillage briévement?
- qu’est ce qu’on détecte par chaque mode de fonctionnement?
- résolution? (hint)
- utilisation principale?
-intéréts et limitations? hint

Answer 19

2 modes
résolution latérale et axiale
intérét (1) limitation 3

Question 20

-principe de l’AFM?
-les modes de fonctionnement?
-résolution?
-quel est le risque majeur de cette technique? comment peut on l’éviter?
-

Answer 20

2 modes

résolution axiale et latérale

Question 21

• qu’est ce que SEM ou MEB?
• qu’est ce qu’on étudie avec? hint
• quel est l’avantage majeur (différence majeur) entre microscopie optique et MEB? hint
• résolution? et grossissement?
• instrumentation (brièvement) (sur cahier )? hint

Answer 21

5 (études possibles!! i know -_-)

• depth of focus
• 4 parties de l’instrument

Question 22

quels sont les signaux qu’on peut détecter pas SEM? selon le détecteur (hint)

Answer 22

5 (but 4 principal)

Question 23

qu’est ce que les electrns secondaires? qu’est ce qu’on analyse avec?
qu’est ce que les electrons refifusés ? qu’est ce que’on analyse avec?

Answer 23

1/ electron secondaire :
- générés de la collision des electrons primaires avec les electrons des couches externes de la matière.
- é de faibles energies
- informations de topographie
2/ electrons diffractés
- une fractions des électrons incidents est retardé par le champ magnétique du noyau et si l'angle de diffusion est supérieur à 180° l'electron peu s'echaper de la surface
- informations de composition chimique
2/ chimie par rayons X
- photons pas des electrins
- signal faible
- information structurelle

Question 24

résumé sem? just so you dont forget the slide

Answer 24

• Grossissement (10 à 300 000)
• BONNE résolution latérale et profondeur de champ
• Contraste topographique et chimique
• Analyse chimique qualitative + quantitative
• sous vide
• matériau conducteur ou métallisation
• cher, maintenance