Cours 3 Flashcards
quels sont les deux types de micriscopies/ spectroscopies utilisées pour l’analyse du vivant?
processus cohérent : SHG; THG; raman stimulé (cars)
processus incohérent : Raman conventionnel; fluorescence; microscopie conventionnel (lumière blanche)
qu’est ce qu’un processus (phénomène cohérent) et incohérent?
cohérent: les photons générés pas l’chantillons ont une relation de phase, méme diraction et méme vecteur de vibration)
incohèrent : les photons n’ont pas de relation de phase.
si on a pas de relation de phase, qu’est ce que on doit avoir pour bien détecter tt les photons?
une grande ouverture numérique
qu’est ce qu’une lumière non polarisée?
tel que la lumière naturelle, c’est une lumière dont le vecteure de vibration E ne présente aucune direction préviligée, son orientation à temps t et landa t est différente.
tu as 6 phènomènes, classe les en deux classes (approche gèométrique; et ondulatoire)?
géométrique : reflection et refraction
ondulatoire: diffraction, absorption, diffusion, interférance
définir la réfraction?
réfracter une lumière : une lumière incidente change de direction de propagation à la rencontre d’un milieu à indice de refraction différent.
il est expliquè par la loi de snell descartes
n sin θ = n’ sin θ’
définit l’interférence?
deux ondes peuvent s’intérférer si elle se rencontrent au méme temps en méme point de l’espace et si elles ont la méme direction de propagation.
les deux s’additionnent et l’onde résultante dépende de la différence de marche (retard).
si nombre pair * landa => constructive
si nombre impaire landa/2 => destructive
si les deux ondes ont des phases opposées l’interférence est distructive.
définir la diffraction?
intervient lorsque un objet rencontre une lumière de longueur d’onde comparable à sa taille.
intervient lorsque il y a une fonte de taille comparable à lande.
chaque point d’une onde peur servir pour la formation d’une nouvelle onde.
l’interférence des ondes peut aboutir à la patterne de diffraction.
définir la diffusion?
phénomène par lequel des particules dévient la lumière dans toutes les direction de l'espace selon sa taille. on a ( elastique et inélastique)
Définir l’absorption?
phénoméne dont leques un échantillon (matériau) absorbe une partie des photons incidents et transmets le reste.
expliquè par la loi de beer lambert.
que est ce que la fluorescence?
le terme général est la luminescence. selon ce qui l'induit le nom change chaleur --> thermoluminescence Rxt chimique => chimiluminescence photons => photoluminescence ( phospho (une seconde à 1min) et fluo (1-2 nanosecondes))
donnez 4 types de lumonophores?
1/ billes luminescentes (100n de nanométres => luminescence forte mais trop grosses)
2/ protéines fluorescentes GFP ( photoblanchiment)
3/ nanocristaux semi conducteurs (QDs, pas de photoblanchiment, mais blinking)
4/ nanodiamants (trop chers)
qu’est ce que le quenching?
désexcitation d’une molécule fluorescente ( excité) par un phènoméne non radiatif = en cédant son energie à une autre molécule au voisinage (le quencher).
Donnez le diagramme de jablonski?
les 3 étapes?
le temps de chaque phénoméne?
abs (10^-15)
fluo (10^-12 à 10^-10 => &à 2 nano sec)
phosphorescence ( 10^-7 à 10^-9)
quels sont les différents modes de désexcitation?
6
transfert d'énérgie d'electrons de protons charge changement conformationnel emission de photons
donnez une description de la forme du spectre d’emission et d’exitation en fluorescence?
quels sont les 3 phènoménes observés?
effet miroire: le spectre d’emission est une mage inversé de celui d’excitation avec un décalage vers les + grandes longueurs d’onde.
décalage de stockes: décalage du spectre d’emission vers les plus grandes landa.
overlapp: necessité de séparer la lumière d’excitation et d’émission par un filtre.
quels sont les quatres caractéristiques de la fluorescence?
loi qui relie le rapport fluiorescence/intencité
donnez les 3 caractères de la microscopie optique?
quels sont les 8 informations sur un objectif?
- nom du constructeur
- grossissement
- ouverture numérique
- type d’émersion
- type de l’objectif
- type de la microscopie
- couleurs
- épaisseurs des lamelles.
donnez la loi de l’ouverture numérique?
ON = n Sin alpha
donnez les signes (lettre) des différentes types d’imersions?
à sec R
huil O
eau W
quelle est la différence entre un objectif à sec et à imersion?
(avantage)
_ sec : faible ON, grande surface de travail,
_ imersion: grande ON, petite surface de travail
qu’est ce que l’ouverture numérique?
la demi angle que fait le cone de lumière avec l’objectif.
en objectif à immersion la profondeur de champ augment au diminue? quel est son effet sur la résolution?
ON augment; profondeur de champ augment => coupe optique fine => meilleure résolution.
comment appelle on l’alignement parfait des instruments dans un montage optique ?
hokler
pourquoi le contraste est mauvais en microscopie à lumière blanche? 3 points
1/ la lumière diffracté possède un retard de λ/4 par rapport à la lumière directe.
2/ l’oeil humail n’est sensible qu’à l’amplitude du champe electrique E (intensité) et pas aux différences de phase.
4/ les objets transparents possédent peu ou pas de contrast.
en microscopie à lumière blanche il faut
- alignement de kohler
- illumination homogène de l’achntillon
- optimiser la résolution et le contrast
comment augmenter le contraste en microscopie à lumière blanche?
donner deux techniques? donnez pour chacune les instruments qui permettent cette imagerie?
on transforme le retard de phase en différences d’intensites par deux méthodes
1/ microscopie à contraste de phase en utilisant
- un diaphragme annulaire
- un objectid à anneu de phase
=> cellules en zones claires et sombres (contrast) alors que en vrai c’est des cellules transparentes (sans contrast)
2/ DIC
- deux polariseurs (1 polar et 1 analy) avant et après l’objectif
- deux prismes de wollaston ( mélieux biréfringents).
cellule en psudo volume
donnez le principe de l’imagerie à contraste de phase? (donnez les 3 cas différents qu’induit l’annue de phase) ?
principe du DIC?
donnez les types de M à fluiorescence?
si tu ne sais pas combien au total regarde answer
5
qu’est ce que la PSF?
qu’est ce que la résolution optique?
donnez les lois de la résolution? cas normal et confocal?
donnez les lois de la résolution? cas normal et confocal?
plus NA est ….. plus XXXX est ….. => …… résolution
na est grande –> tache d’airy petite –> meilleure résolution
donnez l’utilisation de la PSF?
nombre en réponses
comment on mesure la PSF?
3
