Cours 4 Flashcards
donnez le montage d’un microscope à fluorescence simple?
quels sont les outils pour scanner toute la surface de l’échantillon?
pourquoi on filtre 2 fois la fluorescence?
donnez le montage d’un microscope à fluorescence confocal?
laser –> miroire dichroique –> polariseur (milieu biréfringent) –> lentille de focalisation –> objectif –> échantillon –> lentille l2 (extinctrice de faisceau) –> pinhole –> filtre d’émission –> détecteur (photomultiplicateur ++ important)
pourquoi le laser comme source de lumière?
commet choisir son fluorochrome (critères)?
- monochromatiques
- plusieurs types de lasers chacun a une long d’onde
donnez le nom du filtre qui nous permet de séparer les longueurs d’onde ?
qu’est ce qu’il fait?
+ nom du filtre alternatif au dicroique?
donnez ses 4 caractéristiques par rapport au dicroique?
acusto-optical tunabel filter AOTF
c’est un cristal qui avec une onde acoustique permet de séparer la lumieures en plusieurs longueurs d’ondes de façon que chaque direction correspondera a une longueuere d’onde.
- selon la fréquence de l’onde acoustique j’aurai une différents longueur d’onde.
- possibilitéde selectionner jusqu’à 8 raies et moduler leurs intensitées.
2/ fitre acusto_optique beam splitter AOBS
- remplace le filtre dichroique qui a une bande de longueur d’onde fixe.
- grande flexibilité et efficacité
- permet de réduire l’intesité du laser si souhaité t une aquisition rapide
- Controller jusqu’à 8 raies simultanément
quels sont les systèmes de balayage disponibles ? leurs caractèristiques?
quand est ce que’on utilise l’un par rapport à l’autre?
1/ miroire galvanométrique :
a/ balayage en xy
deux miroires qui bougent graçe a des moteurs galvanométrqiues (électriques)
balayage en x continue
balayage en y incrémenté
très rapide
b/ balayage en z
en bougenat l’objectif
miroire : Z drive qui a une grande amplitude, et precission de 10 nm
Objectif piezo : faible amplitude mais grande precission
en bougeant la platine
miroire : grande amplitude et precission
piezo: faible amplitude grande precission.
comment est fait le balayage en xy?
- celui en Z?
lorsque on à d<0,7 AU d>1 AU section optique est ? donnez 2 résultats ? section optique --> X --> X
d<0.7 unités d’aray
la résolution est elevé => la section optique est faible => la résolution en Z est elevé => le signal récupéré est faible.
d> 1 AU
résolution faible ; section optique épaisse => résolution faible en Z => signal élevé
donnez deux types de détecteurs et leurs rendements? - définir le gain image offset résolution moyennage accumulation
le gain = le fait d’amplifier le signal d’entré pour augmenter la luminosité de l’image
- image = ensemble de pixels chacun a une coordonnées et une intensité
- offset = permet d’enlever le bruit de fond de l’image
- résolution: nombre de pixels
- moyennage= une technqiue qui permet de calculer la moyenne arythmiques de chaque valeurs d’intensités de chaque pixel et cela améliore le rapport signal/bruit
- accumulation : amélioration du signal faible
que est ce qu l’optique non liniaire?
section efficace de monophotonique Vs biphotonique.? chiffres
loi de probabilité d’absorption biphotonique?
- quels sont les conditions necessaires pour l’absorption biphotonique? deux
avantages de la microscopie à 2 photons ?
if not sur try hints on answers because this part is important!
SLI => 3 avantages
ABP => 3 avantages
quels est l’air de la courbe de abs mono et bi photonique de l’intensité de fluorescenece en fonction de l’intensité d’excitation?
donnez le rapport intensité de fluorescence et I excitation?
