Cours 3 cinétique enzymatique Flashcards
Que font les enzymes sur le fonctionnement des cellules?
- accélèrent réactions chimique ( baisse EA)
- contrôlent stéréospécificité des S et P
- site de régulations
Quels sont les principes de la catalyse enzymatique? rappel
- accélèrent rx chmique
- contrôlent spécificité des réactions
- aident à spécifier voies réactionnells du substrat
Quelle est la vitesse de réaction chimique simple de : A -> P?
V = d [P] / dt = k [A]
donc k = v/ [A]
Dans quelle condition Vmax = kcat [E0] ?
Lorsqu’on augmente la valeur de [S] à des niveaux de plus en plus haut, on fait en sorte que
toutes les molécules d’enzyme seront saturées par des molécules de substrat. À ce moment:
[ES] = [E0]
équation de MM :
V = Vmax * [S] / Km + [S]
À quoi correspond Km dans le graphique de MM?
Correspond à la concentration de substrat à laquelle la
vitesse V est à la moitié de la vitesse maximal
qu’est-ce que Km?
valeur approximative de l’affinité du substrat pour l’enzyme.
Dans ces conditions la vitesse de la réaction aura atteint son maximum et on pourra écrire ?
Vmax = Kcat [E0]
à quoi correspond la valeur de Kcat/Km?
à une mesure de l’efficacité catalytique d’une enzyme
Quels sont les avantages du graphique Lineweaver-Burke?
- Donne une ligne droite dont la pente correspond à Km/Vmax
- intersection de la droite avec l’ace des Y = 1/vax
- intersection axe X = -1/Km
Quelles réponses nous donne le graphique LB?
Permet d’obtenir des valeurs de Km et Vmax + précise que MM
Comment est exprimmé l’efficacité d’un inhibiteur?
Par sa constante d’inhibition Ki
Que fait un inhibiteur compétitif.
Se lie à l’enzyme (EI),
augmente le Km et Vmax ne change pas.
Dans LB, les droites se croisent à l’axe des Y
que fait inhibiteur incompétitif?
Se lie au complexe ES
Vmax et Km sont diminués
les droites ne se croisent pas dans LB
Que fait inhibiteur non-compétitif?
Se lie à E libre et complexe Es
Vmax est diminué et Km reste pareil si Inhib à même affinité que E que pour ES
Les droites se croisent à l’axe des X dans le négatif
résumés des inhibiteurs
En règle général, quelle concentration de substrat doit être utilisé, si l’enzyme obéit la cinétique MM?
dépassant 10 X le Km
Comment éviter une retro-inhibition ? (5) pour que la vitesse soit linéaire pendant la période d’incubation -> détecter la formation du produit.
- mesurer la rx enzymatique pour une courte durée pour diminuer produit
- haute concentration de substrat
- pH non-physiologique pour enlever proton
- méthode sensible pour détecter produit
- inhibition par le substrat à des hautes []
Par quoi le Vmax et Km sont influencés ? (3)
- ph
- température
- force ionique
Est-ce que certain tampon peut agir comme inhibiteurs?
Oui, en compétionnant avec des substrats possédant des charges négatives
La vitesse de rx augmente d’un facteur _ pour chaque 10 degré?
Facteur 2
Plus la pédiore d’incubation est courte, plus la température apparente de l’activité maximale peut être….
élevé, car a moins de temps pour que l’enzyme se
dénature
qu’est-ce que la méthode discontinue?
enzyme est incubé avec ses substrats pendant une certaine période de temps et la réaction est ensuite arrêtée.
Vérifier l’évolution linéaire
faire +sieurs incubations
Comment est arrêtées l’incubation ?
par une méthode qui provoque la dénaturation de l’enzyme
Quelles méthodes sont utilisé pour dénaturer l’incubation?
La précipitation par acide ou dénaturation thermique
Qu’est-ce que la mesure de l’activité d’une enzyme?
une méthode qui détermine la
quantité de produit généré durant la réaction
- continue (pas arrêté) ou discontinue (dénaturation)
Comment mesurer le produits de réactions enzymatique? (3)
- convertir produit en un autre
- spectrophotométrie
- fluorométrie
Comment fonctionne la détection directe ? (mesure produit)
un des produits de la réaction enzymatique absorbe la
lumière
Comment fonctionne la détection indirecte (mesure produit)
ajoute une enzyme qui utilise le produit de la réaction pour former du NADH par couplage avec une autre réaction
