Cours 3 Flashcards
Lors d’une dépistage immunoenzymatique, il peut y avoir des réactions croisées. Qu’est-ce que ça veut dire?
-Ce produit lorsque des substances d’une même famille (ou d’une famille différente) que la molécule dépistée, mais ayant une structure analogue, donne des résultats faux positifs.
*Plusieurs anticorps pour un même antigène (pcq molécule se ressemble)
*La pseudoéphédrine, ingrédient courant dans les médicaments contre la toux, peut réagir dans les immuno-essais comme de l’amphétamine
-La haute probabilité de faire face à des réactions croisées démontre la nécessité de développer une démarche de confirmation (deuxième méthode d’analyse) d’un résultat positif obtenu par une technique immunologique
C’est quoi l’inconvénient majeur d’une dépistage immunoenzymatique
-Ça peut donner des faux négatifs.
-Des fois un résultat ne vas pas nous amener vers une bonne conclusion (ne guide pas). Ils vont nuire tout au long du processus de l’analyse car ils apparaissent lors du dépistage et si ça donne des faux négatifs, on ne pourrait pas tirer la bonne conclusion ce qui nuit l’analyse entier.
C’est quoi la confirmation quantitative GC-MS et LC-MS
-Méthode référence très spécifique (PEU DE FAUX POSITIFS)
-Conçue pour confirmer le résultat d’immunodépistage ou ses positifs résultants des réactions croisées ou multiples
La séparation des xénobiotiques à même la matrice biologique se fait avec quoi?
Chromatographie gazeuse et liquide
La détection des xénobiotiques, suivant la séparation se fait par quoi?
Spectromètre de masse (MS/MS ou TOF)
Confirmation quantitative de la chromatographie gazeuse (GC): expliquer les différentes composantes de la GC
- Gaz vecteur: Gaz qui circule à l’intérieur du chromatographe, entraînant les analytes à travers
la colonne, depuis l’injecteur jusqu’au détecteur. Le débit du gaz vecteur influe sur le pouvoir de résolution du chromatographe. - Système d’injection: Permet l’introduction de l’échantillon dans la colonne du chromatographe, ainsi que la volatilisation des analytes. La température de l’injecteur est réglée de manière à entraîner la vaporisation de tous les analytes de l’échantillon.
- Colonne: Il existe deux types de colonnes : les colonnes remplies et les colonnes capillaires. Ces colonnes ont un diamètre de quelques millimètres et une longueur de l’ordre du mètre (20 à 50 mètres), sur laquelle les différentes molécules de l’échantillon injecté vont se séparer selon leurs affinités avec la phase stationnaire.
*Une colonne capillaire de faible diamètre, longue, présentant une phase stationnaire dense et ayant des propriétés chimiques similaires aux molécules de l’échantillon
permet typiquement d’obtenir de meilleures séparations. - Four: Plus la température du four est élevée, plus les analytes se déplacent rapidement dans la
colonne, mais moins ils interagissent avec la phase stationnaire, et donc moins les analytes sont séparés.
*Plus la température du four est basse, meilleure est la séparation des analytesmais plus longue est l’analyse.
*Une méthode pour laquelle la température est gardée constante tout au long de l’analyse est appelée « isotherme ». À l’inverse, on peut choisir d’augmenter la température du four au cours de l’analyse : cette méthode est appelée « gradient ». - Système de détection: Mesure le signal émis par les différentes molécules et permets de les identifier. Nécessite des logiciels performants. (FID,TCD,MS)
- Système régulateur: Nécessaires pour les gaz utilisés (hélium, dihydrogène, diazote et air comprimé). Ces gaz peuvent être purifiés par des cartouches filtrantes.
C’est quoi les avantages et inconvénients de la confirmation quantitative de la chromatographie liquide?
-Avantages:
*La dérivation n’est souvent pas nécessaire, mais peut être une option
*Plusieurs types de colonnes chromatographiques disponibles
*Temps d’analyse plus court que la GC-MS
-Inconvénients:
*Souvent moins sensible que la GC-MS (dilution vs concentration) *Conditions analytiques variables et comparaisons interinstruments et
interlaboratoires difficiles
*Développement analytique ardu et moins connu
Expliquer les différentes étapes de la plateforme MS
-Introduction de l’échantillon: L’échantillon peut être introduit directement dans la source
(infusion) ou encore par une méthode séparative (GC-LC)
-Source d’ionisation: Vaporise et ionise les molécules. Peut être utilisée soit en mode positif ou en mode négatif. Plusieurs types de sources existent et sont utilisés selon le résultat recherché et des molécules analysées (CI, EI, ESI, APCI, etc.)
-Analyseur: Sépare les ions en fonction de leur rapport masse/charge (m/z). Il existe des
analyseurs basse résolution (MS/MS) et haute résolution (TOF), permettant de mesurer la masse des analytes.
-Détecteur et traitement: Transforme les ions en signal électrique. Plus les ions sont
nombreux, plus le courant est important. Un détecteur amplifie
le signal obtenu pour qu’il puisse être traité informatiquement.
C’est quoi l’importance de la quantification des métabolites?
-Idéalement, tous les métabolites détectables par la technologie utilisée devraient être quantifiés. (actifs et non actifs)
-Une faible concentration en molécule mère chez un individu ne doit pas être faussement interprétée comme une non-intoxication.(médicament de courte demi-vie)
-On peut également voir si la métabolisation de la molécule s’est déroulée correctement ou s’il y a eu saturation. (AAS, acétaminophène)
-La quantification des métabolites peut donner une idée de la concentration de molécule mère ayant été consommée.
Une bonne préparation de l’échantillon va influencé directement sur quoi?
Une bonne préparation de l’échantillon influera directement sur la limite de détection, la répétabilité (même instrument, même résultat,
même technicien) et la reproductibilité (même instrument, même résultat, technicien différent) de l’analyse.
La multitude de matrices à traiter nécessite l’emploi de techniques variées plus ou moins complexes afin de préparer une échantillon. C’est quoi les techniques?
-Filtration
-Précipitation
-Dialyse
-Extraction liquide – liquide
-Extraction solide-solide
