Cours 2

Question 1

Quel est le principe de spectrométrie de masse?

Answer 1

Générer des ions à partir de composés organiques ou inorganiques par une quelconque méthode d’ionisation, séparer ces ions par leur ratio de masse sur charge (M/Z) et de détecter qualitativement et quantitativement leur M/Z et abondance respective.

Question 2

Quelles sont les sources du spectromètre de masse?

Answer 2

Type forte : impact électronique et ionisation chimique à pression réduite, réservées aux composés facilement volatilisables, et de faible masse. Souvent couplés à la chromato en phase gazeuse.
Type douce : Permet l’ionisation sans provoquer ou peu de fragmentation. La désorption et ionisation par impulsion laser et assistées par une matrice (MALDI) est fréquemment couplée à un spectromètre de masse à temps de vol (TOF) pour analyser les grosses molécules. L’ESI et APCI font partie des méthodes d’ionisation à pression atmosphérique (API) et sont idéalement utilisées pour l’ionisation de molécules de faible masse, en couplage avec la chromatographie en phase liquide.

Question 3

À quoi sert un UPLC?

Answer 3

Ultra Pressure Liquid Chromatography (UPLC)
- Triple quadrupôles
- Séparation des analytes selon leur interaction avec la phase stationnaire d’une colonne (hydrophobique)
- Différent temps d’élution pour divers analytes.

Question 4

À quoi sert ESIS et APCI?

Answer 4

Electrospray ionisation (ESI) & Atmospheric Pressure Chemical Ionisation (APCI)
- Triple quadrupôles
- Ionisation douce permettant l’analyse de molécules intactes
- Source d’ionisation les plus utilisées dans les laboratoires cliniques (EI et MALDI aussi)

Question 5

À quoi sert MSMS?

Answer 5

• Triple quadrupôles
• Filtration et analyses des m/z
• Radiofréquence et courant directe
• Avantages : Balayage rapide et haut rendement de transmission ionique
• Désavantages : Basse résolution m/z

Question 6

Qu’est-ce que le TOF?

Answer 6

• Temps de vol : Les ions sont accélérés avec la même force et ceux avec le plus petit m/z vont plus vite et frappe le détecteur plus rapidement.
• Avantages : En principe, le range analytique de m/z est illimité, haute résolution m/z qui permet l’analyse de masse exacte.
• Désavantages : Quantification moins performante que LC-ESI-MSMS (triples quadrupôles), faiblre rendement de transmission ionique.

Question 7

Quelles sont les limitations analytiques?

Answer 7

• Isotope naturelle
• Analytes isobares
• Fragmentation dans la source ionique
• Adduits
• Réarrangements dans la source ionique
• Analyte avec charge multiples

Question 8

Quels sont les critères de sélection pour un standard interne?

Answer 8

• Doit être une version isotopique lourde de la molécule d’intérêt.
• De préférence doit être composée de 13C et/ou de 15N.
• 2H peut toutefois être utilisé mais est sensible à l’échange deuterium-hydrogène. Il faut éviter de marquer sur un groupement –OH et –NH2
• Devrait avoir au moins 3 unités de masse atomique plus lourde que la molécule d’intérêt.

Question 9

Quels sont les limitations des tests immunologiques?

Answer 9

• Reconnaissance d’un épitope (réactions croisées).
• Pas de standardisation aux niveaux de la reconnaissance des épitopes.
• Effet crochet.
• Anticorps hétérophiles.
• Microclots (petit brin de fibrine)

Question 10

Vrai ou Faux
La posture d’un patient n’a aucun impact sur les valeurs de l’aldostérone et de la rénine?

Answer 10

Faux, il y a un impact.

Question 11

Quel test doit-on faire pour analyser l’aldostérone?

Answer 11

Spectrométrie de masse