cours 2

Question 1

quelles sont les méthodes d’isolements des cellules en cohésion dans un tissu ?

Answer 1

enzymatique
chimique
mécanique
mixte
par explant

Question 2

pouvez vous def la technique des gradients ?

Answer 2

c’est la séparation en gradient de densité basé sur les différences de densité existant entre les lymphocytes et autres cellules
ce principe est utilisé pour isoler la majorité des lymphocytes du sang

Question 3

pouvez vous décrire la méthode des expiants ? la méthode mécanique ? la méthode enzymatique ?

Answer 3

explant :
- prélèvement sur adultes ou embryons
- recueille d’organes dans PBS, Hank ou Earle
-traitement par antibio ( pénicilline + streptomycine )
- explant déposé sur un support plastique ou sur une goutte de SVF
- adhésion des biopsies au support rapide + faible vol de milieu pour éviter le décollement
- puis quantité convenable de milieux ajouté

mécanique :
- prélèvement au broyeur ( potter à piston en verre ), à la seringue ou à la pipette

enzymatique :
enzyme utilisé = protéase
permet de catalyser les réactions de clivages de la chaîne peptidique avec des spécificités d’action plus ou mois def

Question 4

compo de la matrice extra cellulaire

Answer 4

collagènes, protéoglycanes, élastine et glycoprotéines de structure

Question 5

quel est l’enzyme la plus utilisée en culture cell ? avec quoi est elle souvent associée ? comment est inhibée son action ?

Answer 5

la trypsine est l’enzyme la plus utilisée en culture cell. elle est souvent associée à l’EDTA pour le détachement des cellules. son action est inhibée par le SVF

Question 6

qu’est ce qu’une subculture ou repiquage ?

Answer 6

utilisation d’une enzyme protéolytique (trypsine) pour détacher les cellules du support

Question 7

qu’appelle t on libérase ?

Answer 7

c’est une alternative qui contient du collagènase pure + proteases qualitativement et quantativement connues

Question 8

pour la dissociation de quel type de tissu est utilisé la collagènase ?

Answer 8

les tissus à haute teneur en collagène

Question 9

de quels types d’ions est dépendante l’activité de la collagènase ?

Answer 9

la collagènase est calcium dépendante ( Ca2+)

Question 10

complexe enzyme/type de tissu à dissocier

Answer 10

dispase = détachement des cellules épithéliales
pronase = désagrégation du tissu gastrique

Question 11

quels sont les avantage et les inconvénients des différentes méthodes d’isolement des cellules ?

Answer 11

explant :
avantages :
simple et non agressive
inconvénients :
long et méthode sélective

mécanique :
avantages :
très rapide et bon rendement cellulaires
inconvénients :
risque important de lesions cellulaires
limitée à certains organes