cours 6 Flashcards
quel est le rythme proliferatif des cellules normales in vitro ?
il y a un ralentissement
dans quelles situations s’arrête le prolifération cellulaire ?
inhibition de contacte :
elle prolifère jusqu’à recouvrir toute la surface disponible
temporaire
sénescence replicative :
quand une cellule a subi un certain nombre de mitoses elle cesse de se diviser
définitif
qu’est ce que la réduction telometrique ?
caractéristique du vieillissement cellulaire et de la sénescence.
lorsque la longueur des telomeres diminu cela veut dire que la cellules vieillie et ensuite c’est la mort de la cellules
les cellules normales conservent elles leurs fonctions différenciées in vitro ?
non c’est soit modifier soit ça disparais
pourquoi la cryoconservation est elle intéressante ?
pour les cellules génétiquement instable
pour les cellules différenciées à durée de vie limitée
pour les cellules difficiles à obtenir
pour les cellules difficiles à entretenir in vitro
quels sont les principes de la congélation ?
a 10° il y a un ralentissement métabolique
de 0 a -20° il y a formation de cristaux dans l’environnement extracellulaire et le début du processus de déshydratation et de rétrécissement cellulaire
que faut il faire pour prévenir les alteration au cours de la cryopreservation ?
- congélation lente pour extraire toute l’eau
- utilisés des agents cryoprotecteurs pour minimiser les effets de la déshydratation
- conserver en dessous de -130° pour arrêter l’horloge biologique
quel est le cryoprotecteur le plus utilisé et quel est son mode d’action ?
le dimethylsulfoxyde
il forme des liaisons hydrogène avec l’H2O ce qui les maintient à l’état liquide et donc réduit les mouvements de l’eau à travers la membrane
augmente la viscosité
le rétrécissement cellulaire est limité
il ralentit et évite la formation des cristaux de glace
Il protège les protéines de la membrane plasmique de la dénaturation
avant la congélation, comment doit être la culture des cellules ?
viabilité de la population cellulaire essentielle
il faut changer le milieu 24 heures avant de les récolter
la suspensions de cellules récolté doit être entre 1 à 10 millions de cellules viable/ml
quels sont les récipients de conservation ?
cryotubes à bouchon coiffant ou entrant
quelle doit être la vitesse de réfrigération ?
De - 1 °C à -3 °C par minute.
place-t-on directement les cellules dans l’azote liquide ?
non, les cellules sont d’abord placés dans des récipient isolant (-80°C) ou dans du papier absorbant et placer dans un congélateur à -80 °C pendant une nuit.
c’est après cela qu’elles sont transférées dans l’azote
comment sont décongeler les cellules ?
Par une décongélation rapide de 60 à 90 secondes à 37° elle empêche la formation de cristaux de glace pouvant endommager la cellule pendant la réhydratation
pouvez-vous citer des méthodes d’étude des cellules en culture ?
la méthode cytologiques cytochimique
La méthode biochimique sur homogenats cellulaire.
Méthode de biologie moléculaire sur extrait cellulaire,
Méthode immunologique
Méthode électrophysiologique
Transfection
fusion cellulaire.
