Cours 1 : ADN; Isolement, purification et visualisation Flashcards
Avec quoi faut-il traiter les cellules afin de dégrader le peptidoglycan de la paroi bactérienne?
Le lysozyme
Avec quoi faut-il traiter les cellules pour dissoudre les lipides de la membrane cellulaire?
Un détergeant tel que le SDS
Le SDS peut dissoudre les lipides, mais aussi _____
Dénaturer les protéines
Lors de l’extraction de l’ADN de cellules bactériennes, comment l’ADN est purifié?
Par centrifugation et extraction chimique (phénol)
Comment l’ADN est extraite des cellules bactériennes sans l’utilisation de phénol?
Passage sur une colonne contenant une résine (silice) qui ne lie que de l’ADN
Que fait la ribonucléase A?
Elle dégrade l’ARN mais pas les macromolécules d’ADN
Qu’est-ce qui permet la précipitation des macromolécules d’ADN?
L’ajout d’un volume égal d’alcool
Quelle est la méthode physique la plus utilisée pour visualiser et analyser l’ADN?
L’électrophorèse
Vrai ou faux : Lors de l’électrophorèse, le tampon ayant servi à faire le gel est différent du tampon pour la solution
Faux, il doivent être de compositions identiques
Est-ce que la porosité du gel de polyacrymalide est plus ou moins dense que celle de l’agarose?
Plus dense (donc filtre des fragments plus petits)
Quel est le but de l’EGCP?
Forcer l’avancement du fragment dans quelque chose où il ne devrait habituellement pas passer
Vrai ou faux : Avec l’EGCP, on peut visualiser les cassures qui sont générées par des mutations
Vrai
Que veut dire DGGE?
Électrophorèse sur gel en gradient dénaturant
Que fait le DGGE?
Il sépare les molécules d’ADN ayant seulement un nucléotide de différence dans leur séquence
Vrai ou faux : Lors du DGGE, le profil de dénaturation de l’ADN avec une seule mutation sera identique à celui de l’ADN sauvage
Faux, il sera considérablement différent
Quels sont les deux facteurs pour lesquels est dû le DGGE?
- Une température modérément élevée mais constance
2. Une dénaturation chimique avec un mélange d’urée et de formamide
Vrai ou faux : Lors d’un DGGE, le gradient de dénaturation chimique peut-être disposé en parallèle ou perpendiculairement par rapport à la direction de migration
Vrai
Quelle est la différence entre le DGGE et le SSCP?
Alors que le DGGE se fait en conditions dénaturantes, pour le SSCP, l’échantillon est d’abord dénaturé et l’électrophorèse se déroule en conditions non-dénaturantes
