Comparação de Perfis Proteicos por Electroforese-Poliacrilamida Flashcards
O movimento de partículas carregadas num meio fluido graças à ação de um campo eléctrico designa-se por….
Electroforese.
O movimento destas partículas pode dar-se em dois sentidos. Quais?
No sentido do pólo positivo, o ânodo.
Ou no sentido do pólo negativo, o câtodo.
De acordo com a carga global da espécie química em questão.
Nas ciências biológicas, esta técnica é mais usada para separar moléculas de….
DNA; RNA e proteínas.
Com o objetivo de as analisar ou purificar.
Indique que géis são usados na electroforese de ácidos nucleicos e proteínas?
Nos ácidos nucleicos, gel de agarose.
Nas proteínas, gel de poliacrilamida.
Procura-se que a separação das proteínas seja realizada somente de acordo com….
O seu tamanho, que se relaciona com o seu peso molecular e a sua massa.
Para uma electroforese de proteínas bem sucedida é de extrema importância que estas sejam….
Desnaturadas e que a sua densidade de carga seja uniformizada.
Quanto mais pequenas forem as proteínas…a sua migração no gel.
Rápida.
As bandas podem ainda ser recolhidas e sujeitas a
etapas posteriores de purificação e análise.
Verdadeiro ou Falso?
Verdadeiro.
Qual o corante usado nesta atividade?
O azul de Coomassie.
Aqui pode ser usado o método Western blot. Explique em que consiste.
Um processo de imunodeteção, permite e identificar especificamente as proteínas de interesse e, para isso, todas as proteínas
do gel são transferidas para uma membrana.
Utilizaram-se dois géis. Distinga-os pela sua concentração.
O running gel e o stacking gel. O running tem maior concentração de acrilamida, logo poros mais pequenos.
Porque se deve garantir que o gel não inclui bolhas de ar?
As bolhas podem interferir na separação adequada das proteínas na amostra durante a eletroforese em gel. A formação de bolhas pode levar a distorções na aparência do gel, como linhas irregulares, e consequentemente prejudicar a leitura dos resultados. As bolhas também podem afetar a uniformidade da concentração do gel, criando regiões com diferentes densidades que podem afetar a migração das proteínas.
Coloca-se etanol ou isopropanol na superficie do running gel. Porque se realiza este passo?
Para alisar a superfície do gel e evitar que algumas proteína entrem primeiro que outras.
Porque se utilizam dois géis, com diferente concentração final de acrilamida?
Qual a função de cada um dos componentes dos géis?
Com maior concentração tem maior resolução para separar as proteínas pequenas.
H2O: solvente (?)
Tris-HCl: tampão
Acrilamida: forma a matriz
SDS: detergente; uniformiza negativamente as cargas
APS e TEMED: catalisam a polimerização da acrilamida.
Porque se adicionou o tampão de Laemmli às amostras?
Para manter o pH da amostra no momento da desnaturação.
O tampão é importante para desnaturar as proteínas, desfazer as ligações dissulfeto e carregar as amostras no gel para separação com base em tamanhoecarga.
Porque se inclui um padrão de pesos moleculares?
Para servir de comparação de tamanho para as bandas observadas nas nossas amostras.
As proteínas migram em direção a qual dos eléctrodos?
A que se deve esse movimento?
Quais as proteínas que migram mais rapidamente? Porquê?
Migram para o polo positivo (as proteínas estão uniformizadas com carga negativa).
As proteínas mais pequenas.
Por causada rede de acrilamida.
Porque se faz a coloração do gel?
Para se poder observar as amostras, pois sem ele estas são transparentes.
Porque se submete o gel a uma solução descorante?
Para tirar o corante dos lugares inespecíficos.
Quantas bandas observa na amostra de BSA? Como se explica esta observação?
BSA apresenta 2 bandas, porque é uma proteína purificada com dois tamanhos de proteínas.
