Comparação de Perfis Proteicos por Electroforese-Poliacrilamida Flashcards
O movimento de partículas carregadas num meio fluido graças à ação de um campo eléctrico designa-se por….
Electroforese.
O movimento destas partículas pode dar-se em dois sentidos. Quais?
No sentido do pólo positivo, o ânodo.
Ou no sentido do pólo negativo, o câtodo.
De acordo com a carga global da espécie química em questão.
Nas ciências biológicas, esta técnica é mais usada para separar moléculas de….
DNA; RNA e proteínas.
Com o objetivo de as analisar ou purificar.
Indique que géis são usados na electroforese de ácidos nucleicos e proteínas?
Nos ácidos nucleicos, gel de agarose.
Nas proteínas, gel de poliacrilamida.
Procura-se que a separação das proteínas seja realizada somente de acordo com….
O seu tamanho, que se relaciona com o seu peso molecular e a sua massa.
Para uma electroforese de proteínas bem sucedida é de extrema importância que estas sejam….
Desnaturadas e que a sua densidade de carga seja uniformizada.
Quanto mais pequenas forem as proteínas…a sua migração no gel.
Rápida.
As bandas podem ainda ser recolhidas e sujeitas a
etapas posteriores de purificação e análise.
Verdadeiro ou Falso?
Verdadeiro.
Qual o corante usado nesta atividade?
O azul de Coomassie.
Aqui pode ser usado o método Western blot. Explique em que consiste.
Um processo de imunodeteção, permite e identificar especificamente as proteínas de interesse e, para isso, todas as proteínas
do gel são transferidas para uma membrana.
Utilizaram-se dois géis. Distinga-os pela sua concentração.
O running gel e o stacking gel. O running tem maior concentração de acrilamida, logo poros mais pequenos.
Porque se deve garantir que o gel não inclui bolhas de ar?
As bolhas podem interferir na separação adequada das proteínas na amostra durante a eletroforese em gel. A formação de bolhas pode levar a distorções na aparência do gel, como linhas irregulares, e consequentemente prejudicar a leitura dos resultados. As bolhas também podem afetar a uniformidade da concentração do gel, criando regiões com diferentes densidades que podem afetar a migração das proteínas.
Coloca-se etanol ou isopropanol na superficie do running gel. Porque se realiza este passo?
Para alisar a superfície do gel e evitar que algumas proteína entrem primeiro que outras.
Porque se utilizam dois géis, com diferente concentração final de acrilamida?
Qual a função de cada um dos componentes dos géis?
Com maior concentração tem maior resolução para separar as proteínas pequenas.
H2O: solvente (?)
Tris-HCl: tampão
Acrilamida: forma a matriz
SDS: detergente; uniformiza negativamente as cargas
APS e TEMED: catalisam a polimerização da acrilamida.
Porque se adicionou o tampão de Laemmli às amostras?
Para manter o pH da amostra no momento da desnaturação.
O tampão é importante para desnaturar as proteínas, desfazer as ligações dissulfeto e carregar as amostras no gel para separação com base em tamanhoecarga.
