clase 14 Flashcards
en que esta basada la hibridacion
está basada en el proceso de renaturalización de dos cadenas sencillas de DNA.
Que desnaturaliza a los acidos nucleicos
se desnaturalizan por efecto de agentes químicos o físicos, perdiendo su conformación tridimensional.
QUIMICAMENTE a que se debe la desnaturalizacion
se debe tanto a la rotura de los puentes de hidrógeno entre pares de bases como de las interacciones hidrofóbicas entre bases apiladas.
analizar el siguiente diagrama
Nombra algunos elementos empleados para desnaturalizar el ADN
moléculas
sencillas, altamente polares, con grupos amino y
carbonilo, estos les permiten competir en la
formación de enlaces de hidrógeno.
que proceso recibe el nombre de hibridacion
Formación de moléculas dúplex de DNA cuyas
hebras tienen distinto origen (distinto origen o ácido
nucleico) recibe el nombre de hibridación.
que aumenta la estabilidad de un hibrido
La estabilidad del híbrido es tanto mayor cuanto más
elevada sea la proporción de bases complementarias
y mayor la longitud de las secuencias apareadas.
en que se basa el principio basico del ensayo de hibridacion
Todos se basan en la gran especificidad de la
interacción entre bases complementarias.
que se requiere para que la hibridacion permita identificar en un genoma o en una muestra cualquier de acido nucleico, una secuencia particular
se requiere de dos elementos básicos:
1. Secuencia diana: Gralmente obtenido con enzimas de restricción.
2. Sonda: fragmento corto de AN, secuencia conocida
y complementaria a la secuencia diana (marcado
radiación, coloreado, fluorescente)
cuales son los factores que influyen sobre la hibridacion
- Concentración DNA o RNA diana.
- Concentración y tamaño de la sonda.
- Temperatura y tiempo de hibridación.
- Características del medio de reacción (pH, fuerza
- iónica, concentración de agentes desnaturalizantes,
- adición de ciertos polímeros, etc.)
como se clasifican los metodos de ensayo de hibridacion
en tres grupos
caracteristica de la hibridacion en fase liquida
- Inicialmente empleado.
- Utiliza muestra RNA o DNA en disolución.
- Cinética es más rápida.
- Todas las moléculas diana son igualmente accesibles.
caracteristicas de hibridacion de soporte solido
- Pueden procesar varias muestras simultáneamente
- facilitando el control de la hibridación.
- Cinética es más lenta.
- Proceso menos eficiente.
- Sencillo de realizar y más versátil.
caracteristicas de la hibridacion dot-blot y slot-blot
- Método más simple y común, gracias a su posibilidad
- de emplear muestras de AN sin purificar (sangre,
- heces, esputo).
- Muestra aplica gota a gota (dot-blot)
- Muestra aplica en manchas alargadas (slot-blot)
- Ambas sobre un filtro de nitrocelulsa o nylon, cuyas
- propiedades de absorción fijan las moléculas de
- ácido nucleico y proteína.
com es la clasificacion de las sondas en funcion del metodo de preparacion
- Longitud o tamaño de la secuencia diana.
- Método de marcaje y detección.
- Tamaño de la sonda.
- Método de preparación (clonación celular o acelular, síntesis química).
Caracteristicas de las sondas obtenidas por clonacion acelular
- Sondas de menor tamaño (método PCR).
- Consta de un menor número de fases, por lo que las sondas se obtienen de forma más rápida y sencilla.
cuales son los metodos directos e indirectos de marcaje de sonda
- La sonda lleva unido un marcador detectable (método directo de marcaje).
- Otra molécula no detectable o grupo indicador, con la capacidad de ser reconocido posteriormente por una proteína detectora, que es la que va marcada (método indirecto)
