clase 14

Question 1

en que esta basada la hibridacion

Answer 1

está basada en el proceso de renaturalización de dos cadenas sencillas de DNA.

Question 2

Que desnaturaliza a los acidos nucleicos

Answer 2

se desnaturalizan por efecto de agentes químicos o físicos, perdiendo su conformación tridimensional.

Question 3

QUIMICAMENTE a que se debe la desnaturalizacion

Answer 3

se debe tanto a la rotura de los puentes de hidrógeno entre pares de bases como de las interacciones hidrofóbicas entre bases apiladas.

Question 4

analizar el siguiente diagrama

Answer 4

Question 5

Nombra algunos elementos empleados para desnaturalizar el ADN

Answer 5

moléculas
sencillas, altamente polares, con grupos amino y
carbonilo, estos les permiten competir en la
formación de enlaces de hidrógeno.

Question 6

que proceso recibe el nombre de hibridacion

Answer 6

Formación de moléculas dúplex de DNA cuyas
hebras tienen distinto origen (distinto origen o ácido
nucleico) recibe el nombre de hibridación.

Question 7

que aumenta la estabilidad de un hibrido

Answer 7

La estabilidad del híbrido es tanto mayor cuanto más
elevada sea la proporción de bases complementarias
y mayor la longitud de las secuencias apareadas.

Question 8

en que se basa el principio basico del ensayo de hibridacion

Answer 8

Todos se basan en la gran especificidad de la
interacción entre bases complementarias.

Question 9

que se requiere para que la hibridacion permita identificar en un genoma o en una muestra cualquier de acido nucleico, una secuencia particular

Answer 9

se requiere de dos elementos básicos:

1. Secuencia diana: Gralmente obtenido con enzimas de restricción.
2. Sonda: fragmento corto de AN, secuencia conocida
y complementaria a la secuencia diana (marcado
radiación, coloreado, fluorescente)

Question 10

cuales son los factores que influyen sobre la hibridacion

Answer 10

• Concentración DNA o RNA diana.
• Concentración y tamaño de la sonda.
• Temperatura y tiempo de hibridación.
• Características del medio de reacción (pH, fuerza
• iónica, concentración de agentes desnaturalizantes,
• adición de ciertos polímeros, etc.)

Question 12

como se clasifican los metodos de ensayo de hibridacion

Answer 12

en tres grupos

Question 13

caracteristica de la hibridacion en fase liquida

Answer 13

• Inicialmente empleado.
• Utiliza muestra RNA o DNA en disolución.
• Cinética es más rápida.
• Todas las moléculas diana son igualmente accesibles.

Question 14

caracteristicas de hibridacion de soporte solido

Answer 14

• Pueden procesar varias muestras simultáneamente
• facilitando el control de la hibridación.
• Cinética es más lenta.
• Proceso menos eficiente.
• Sencillo de realizar y más versátil.

Question 15

caracteristicas de la hibridacion dot-blot y slot-blot

Answer 15

• Método más simple y común, gracias a su posibilidad
• de emplear muestras de AN sin purificar (sangre,
• heces, esputo).
• Muestra aplica gota a gota (dot-blot)
• Muestra aplica en manchas alargadas (slot-blot)
• Ambas sobre un filtro de nitrocelulsa o nylon, cuyas
• propiedades de absorción fijan las moléculas de
• ácido nucleico y proteína.

Question 16

cuales son las 5 etaps de la hibridacion de Southern

Answer 16

1. Separación electroforética.
2. Desnaturalización.
3. Transferencia.
4. Hibridación.
5. Detección.

Question 17

cuales son las caracteristicas de la hibridacion de nothern

Answer 17

• Proceso idéntico al Southern, pero el ácido nucleico analizado es RNA.
• Por su menor tamaño no es necesaria su fragmentación.
• Emplea principalmente para obtener informaciónsobre el tamaño de RNAs y sobre el modelo de expresión de genes específicos.

Question 18

Que es la hibridacion In Situ

Answer 18

Hibridación en soporte sólido, en la que la sonda se
aplica sobre muestras en la ubicación natural,
generalmente aquellas preparadas para microscopia.

Question 19

para que se emplea la transferencia de Western

Answer 19

Para detectar las proteínas presentes en la
muestra.

Question 20

el papel de la sonda equivale a la del anticuerpo en un….

Answer 20

inmunoensayo

Question 21

com es la clasificacion de las sondas en funcion del metodo de preparacion

Answer 21

• Longitud o tamaño de la secuencia diana.
• Método de marcaje y detección.
• Tamaño de la sonda.
• Método de preparación (clonación celular o acelular, síntesis química).

Question 22

son sondas llamadas sondas genómicas, clonadas o biológicas.

Answer 22

Sonda ADN (clonación celular)

• Las primeras en utilizarse
• Longitud variable, entre 100 bases y cientos de Kb.

Question 23

Caracteristicas de las sondas obtenidas por clonacion acelular

Answer 23

• Sondas de menor tamaño (método PCR).
• Consta de un menor número de fases, por lo que las sondas se obtienen de forma más rápida y sencilla.

Question 24

de que forma se diseñan las sondas sinteticas

Answer 24

se diseñan de forma que contengan la secuencia
complementaria a una zona del DNA diana (parte del
gen que se desea analizar).

Question 25

que es necesario para diseñar una sonda

Answer 25

1. Conocer la secuencia completa de la proteína, o al menos un fragmento de ella, al que corresponderá la secuencia diana de DNA. 2. A partir de esa secuencia aminoacídica, se establece (base código genético) la secuencia nucleotídica que habrá de tener el DNA. 3. Para reducir su número, se selecciona el segmento de secuencia que posea la menor degeneración posible. 4. Una vez sintetizadas todas las sondas, se ensaya su hibridación con el DNA de partida, una de ellas será la correcta.

Question 26

cual es el principio basico del marcaje de sonda

Answer 26

es la unión química o conjugación del marcador a la sonda.

Question 27

cuales son los metodos directos e indirectos de marcaje de sonda

Answer 27

* La sonda lleva unido un marcador detectable (método directo de marcaje). * Otra molécula no detectable o grupo indicador, con la capacidad de ser reconocido posteriormente por una proteína detectora, que es la que va marcada (método indirecto)