Citometría de flujo Flashcards
¿Qué es la citometría de flujo?
Medición de células, donde pasan una tras otra de manera ordenada por un detector, y se van contando una a una.
¿A qué otra técnica viene acoplada la citometría de flujo?
Se encuentra acoplada a una segunda técnica de fluorescencia llamada FACS (Fluorescence Activated Cell Sorting) traducida como selección celular activada por fluorescencia.
¿Cómo funciona la FACS?
Luego de que las células ingresan una a una, el detector de luz detecta cierta fluorescencia específica y son enviadas por “un camino”, si se detectan otro tipo de fluorescencia son enviadas por otro camino diferente, permite separar poblaciones.
¿Por qué se dice que la FACS se asocia a un anticuerpo?
Los anticuerpos detectan proteínas de forma selectiva y especifica como los CD (no entrega la función de la proteína) permite saber si está o no en la célula.
¿Cuándo una célula es CDX+?
Cuando posee el marcador CD que se busca
¿Cómo se genera la fluorescencia?
un átomo debe ganar un fotón de cierta energía, que hará que un electrón pase a un estado excitado (haciendo que se mueva a un estado de alta energía). Cuando el electrón vuelve a su estado basal emite un fotón de luz el cual puede ser de distintos tipos de fluorescencia.
¿Qué caracteriza a la fluorescencia?
La energía del fotón emitida es más bajo que el fotón que llego. Si llega un fotón de energía (verde), debería esperar a lo menos del fotón emitido un color más arriba (rojo). Las sondas que se utilizan se excitan con un láser de una longitud de onda de 480 nm (verde) y emiten luego fluorescencia roja.
¿De qué color se ve un CD8+, un CD4+ y un doble positivo?
Anticuerpo marcado con CD8+ se vera de color rojo, así mismo el CD4+ se vera de color verde, y si es doble positivo (CD4+/CD8+) se vera de color amarillo.
Considerando un gráfico clásico de citometría de flujo con cuadrantes CD4+ (sup - izq) CD4+8+ (sup-dch) CD4-CD8- (inf-izq) y CD8+ (inf-drch):
¿Qué se puede decir de las células en el cuadrante CD4-/CD8- ?
Son dobles negativos ya que no poseen ninguno de los receptores de superficie ni para CD4 ni CD8. Esto es a lo que se le llama ruido, ya que es una señal no específica.
Considerando un gráfico clásico de citometría de flujo con cuadrantes CD4+ (sup - izq) CD4+8+ (sup-dch) CD4-CD8- (inf-izq) y CD8+ (inf-drch)
¿Qué se puede decir de las células en el cuadrante CD8+?
Presentan una alta intensidad con respecto a CD8, pero una baja intensidad de CD4. Esta población es CD8 positiva y CD4 negativo
Considerando un gráfico clásico de citometría de flujo con cuadrantes CD4+ (sup - izq) CD4+8+ (sup-dch) CD4-CD8- (inf-izq) y CD8+ (inf-drch)
¿Qué se puede decir de las células en el cuadrante CD4+?
Presentan una alta intensidad con respecto a CD4, pero una baja intensidad de CD8. Esta población es CD4 positiva y CD8 negativo.
Considerando un gráfico clásico de citometría de flujo con cuadrantes CD4+ (sup - izq) CD4+8+ (sup-dch) CD4-CD8- (inf-izq) y CD8+ (inf-drch)
¿Qué se puede decir de las células en el cuadrante CD4+ /CD8+?
Presentan una alta fluorescencia con respecto a CD4 y CD8, es decir son doblemente positivo.
¿Mediante qué tipo de enlace se unen los anticuerpos a sus antígenos?
De manera NO covalente (Puentes de hidrogeno, ion-ion, ion-dipolo, y dipolo-dipolo
