Citofluo di Martina

Question 1

Come funziona la citofluorimetria?

Answer 1

C’è un flusso laminare di cellule che interseca una sorgente luminosa

Question 2

Cosa può vedere di una cellula la citofluorimetria?

Answer 2

Granularità, volume, fluorescenza, linea di appartenenza, stadio differenziativo, asincronia maturativa, aberrazioni antigeniche

Question 3

Che tipi di citometria esistono?

Answer 3

Quella normale e quella a flusso

Question 4

Cosa fa la citometria non a flusso?

Answer 4

localizza gli antigeni e valuta la morfologia quantitativa e qualitativa, ma non può fare un’analisi su più parametri e non valuta i sottotipi di diverse cellule

Question 5

Cosa fa la citometria a flusso?

Answer 5

analizza molte cellule in poco tempo, fa un’analisi in più parametri e ha un approccio multiparametrico quantitativo e qualitativo

Question 6

Quali sono i principi della citofluorimetria?

Answer 6

1) ci sono emissioni di diversi colori in base alla sostanza fluorescente, poi separate da filtri ottici
2) i fotomoltiplicatori trasformano segnali luminosi in impulsi elettrici proporzionali alla luce raccolta

Question 7

Cos’è il FSC?

Answer 7

Il fast forward scatter, che analizza dimensioni della cellula e indice di rifrazione

Question 8

Cos’è il SSC?

Answer 8

Side scatter, che analizza la granularità e la complessità interna della cellula

Question 9

Cosa fa l’immunofenotipo?

Answer 9

Permette di identificare e numerare gli elementi acquisiti grazie a agenti specifici, dando info su diagnosi, prognosi e malattia residua minima

Question 10

Quali sono i processi per l’immunofenotipo?

Answer 10

Si ussano 6-8 colori per identificare gli antigeni superficiali, del citoplasma e del nucleo; poi si identifica il LAIP (fenotipo leucemia-associato), ottenendo la “firma fenotipica” del paziente, e si usano le aberrazioni specifiche per la diagnosi e lo studio dell’MMR (major molecular remission)

Question 11

Quali sono le caratteristiche di un buon marcatore leucocitario per far parte di un cluster di differenziazione?

Answer 11

Deve identificare un particolare tipo cellulare o uno studio differenziativo, deve avere struttura biochimica ben definita e essere riconosciuto da anticorpi monoclonali diversi

Question 12

A cosa servono i marcatori leucocitari?

Answer 12

A dererminare i marcatori di differenziamento, di superficie, intraplasmatici e intranucleari, inoltre valutano il contenuto di DNA e discriminano cellule vive da apoptotiche e necrotiche

Question 13

Cosa vuol dire MIF?

Answer 13

Mean intensity fluorencence: è il valore fornito dal citofluorimetro

Question 14

Cosa rappresenta la Mean Intensity Fluorescence?

Answer 14

è il rapporto tra fluorescenza del campione e dell’isotopo: è proporzionale ai siti di legame

Question 15

Cos’è la ABC?

Answer 15

Anti-body binging capacity: è un valore ottenuto confrontando l’espressione di un anticorpo con una curva di riferimento costruita con rapporti noti tra molecole di anticorpi/ valore di fluorescenza

Question 16

Cosa permette la combinazione degli anticorpi?

Answer 16

l’identificazione di una specifica tipologia cellulare, del grado di differenziamento e il riconoscimento di cellule anomale

Question 17

Che cos’è un approccio shotgun?

Answer 17

L’uso di 25-35 anticorpi per paziente scelti per diagnosticare la maggior parte dei disturbi, con l’uso di meno provette possibili

Question 18

Cos’è l’approggio screening?

Answer 18

L’uso di un set minimo di anticorpi (10-20) per pazienti: usa meno anticorpi ma richiede più tempo

Question 19

Che cos’è la CD45?

Answer 19

Una proteina che si trova in tutti i leucociti e serve alla regolazione della trasduzione del segnale durante l’ematopoiesi

Question 20

Perché la CD45 è importante?

Answer 20

Perché di solito non è nei lipid rafts, ma se lo è vuol dire che c’è trasformazione oncogena nella leucemia mieloide acuta

Question 21

Cosa avviene nei grafici a punti a doppio parametro?

Answer 21

Due diversi markers sono comparati e valutati insieme: è una marcatura mutualmente esclusiva e si può avere co-espressione e non-espressione

Question 22

A cosa è dovuta l’intensità della colorazione fluorescente?

Answer 22

Dal confronto tra controllo negativo e colorazione dell’anticorpo

Question 23

Che vuol dire se si ha colorazione negativa?

Answer 23

Che l’intensità della fluorescenza è simile al controllo negativo

Question 24

Che vuol dire se si ha colorazione positiva?

Answer 24

Che la fluorescenza del marker è maggiore del controllo negativo

Question 25

Che vuol dire se si ha colorazione moderata?

Answer 25

Che la luminosità è 10 volte superiore al controllo negativo

Question 26

Colorazione brillante?

Answer 26

Luminosità 100 volte superiore al controllo negativo

Question 27

Qual è un’espressione normale di anticorpi per i linfociti B?

Answer 27

Positività per CD19, 20, 22 e 79, e negatività per i marker dei linfociti T (altrimenti si parla di espressione aberrante, usati nella MRD–Malattia minima residua)

Question 28

Qual è un’espressione normale di anticorpi per i linfociti T?

Answer 28

Positività per CD2, 3, 5, 7, negatività per i marker dei linfotici B (altrimenti si parla di espressione aberrante, usati nella MRD-malattia minima residua)

Question 29

Che cos’è la LAM?

Answer 29

Leucemia mieloide acuta

Question 30

Come si fa diagnosi di LAM?

Answer 30

Con esame di sangue e midollo osseo, colorati con Giemsa: distingue la LAM dalla LAL (linfoide acuta), oppure con la colorazione citochimica con mieloperossidasi (MPO) e sudan nero B

Question 31

Le cellule blastiche nella LAM hanno gradi parziali di maturazione: quali classificazioni esistono?

Answer 31

-WHO: i blasti sono più del 20%
-FAB: i blasti sono più del 30%

Question 32

Le leucemie si dividono in diverse “serie”: quali?

Answer 32

-M0-M3: serie granulocitaria
-M4-M5: serie monocitaria
-M6: serie eritrocitaria
-M7: serie megacariocitaria

Question 33

Cosa includono le indagini di primo livello per la leucemia acuta (LA)?

Answer 33

L’uso di pochi anticorpi monoclonali per indicare la linea cellulare di interessa

Question 34

Cosa identifica il marcatore CD45 insieme al side scatter (SSC)?

Answer 34

Identifica i monociti maturi, i granulociti, i linociti e i precursori eritrocitari: le cellule che avanzano sono nella “bermuda area”, cioè i blasti presenti solo nelle leucemie acute Linfoidi (LAL)

Question 35

La LAL ha l’MPO (test per la mieloperossidasi)?

Answer 35

No, è tipico della LAM

Question 36

Cosa è carattrizzata da CD3?

Answer 36

LLA (linfoide) serie T

Question 37

Cosa si ottiene con l’indagine di secondo livello della leucemia acuta?

Answer 37

Si ottengono informazioni specifiche sul livello di differenziamento e sullo stadio di maturazione della leucemia

Question 38

Cos’è il RAR-alfa?

Answer 38

è un recettore nucleare per l’acido retinoico e serve per la differenziazione delle cellule mieloidi