Chap 3 - Gène de l'ovalbumine et de diverses maladies, transfert de type Southern et Northern Flashcards
Que permet l’analyse de type Southern sur l’ADN génomique?
Elle permet d’analyser l’état de l’ADN dans le génome sans l’avoir cloné. Elle permet donc de répondre à la question: la séquence d’ADN d’intérêt est-elle présente dans un génome quelconque et si oui, dans quel état?
Qu’a étudié l’équipe de Chambon?
Le gène de l’ovalbumine. L’un de premier dont la structure intron-exon a été établie grâce à la méthode de Southern.
Comment la méthode de Southern a permis de découvrir a présence d’exon-intron dans le gène de l’ovalbumine?
L’ADN est fragmenté par EcoRI puis séparé par électrophorèse. Ensuite il est transféré sur un filtre où il est fixé et dénaturé. Il est ensuite hybridé avec l’ADNc cloné, lavé et autoradiographié. Le résultat montre 4 bandes, donc que le gène de l’ovalbumine comporte des sites de restriction à EcoRI (car c’est l’ADNc du gène qui est utilisé). Comme l’ADNc ne comporte pas de tels sites, il doit y avoir quelque chose de plus dans le gène qui ne se retrouve pas dans l’ADNc, soit les introns.
Que permet l’analyse de type Northern sur l’ARNm?
Il permet de répondre aux questions:
(1) Dans quel tissu un gène particulier est-il exprimé et à quel niveau?
(2) Quelle est la longueur de l’ARNm qui correspond au gène?
Il fourni également un estimé du niveau d’expression du gène.
Que permet l’analyse de type Northern sur l’ARNm?
Il permet de répondre aux questions:
(1) Dans quel tissu un gène particulier est-il exprimé et à quel niveau?
(2) Quelle est la longueur de l’ARNm qui correspond au gène?
Il fourni également un estimé du niveau d’expression du gène.
Expliquer comment faire un transfert de type Northern.
Il faut d’abord extraire l’ARN total du tissu en le séparant de l’ADN et des protéines et le faire migrer pour séparer les ARNm selon leur taille (il faut faire miger en parallèle des marqueurs de longueur). Puis, on transfert sur un filtre de nylon et faire un hybridation avec une sonde marquée et spécifique au gène d’intérêt. Ensuite, on lave le filtre et on fait une autoradiographie. Les bandes noires correspondent aux longueurs des molécules d’ARN reconnues par la sonde.
Nommez une différence technique entre le type Southern et Northern.
Southern: on doit cliver l’ADN avant la migration.
Northern: on ne clive pas l’ARN avant la migration.
Comment le clonage des récepteurs des LDL s’est effectué?
Le récepteur des LDL bovin a été purifié puis 2 sondes dégénérées ont été synthétisées à partir d’un bout de la séquence établi pour cribler une banque d’ADnc bovine. Les clones positifs ont été retenues (l’ADNc du bovin a été utilisé pour obtenir l’ADNc humain car les exons conservés chez les mammif) et les insertions clonées ont servi à cribler une banque d’ADNc humaine. De l’ADNc pleine longueur est obtenue et la séquence protéique est déduite.
Comment le clonage des récepteurs des LDL s’est effectué?
Le récepteur des LDL bovin a été purifié puis 2 sondes dégénérées ont été synthétisées à partir d’un bout de la séquence établi pour cribler une banque d’ADnc bovine. Les clones positifs ont été retenues (l’ADNc du bovin a été utilisé pour obtenir l’ADNc humain car les exons conservés chez les mammif) et les insertions clonées ont servi à cribler une banque d’ADNc humaine. De l’ADNc pleine longueur est obtenue et la séquence protéique est déduite. Cet ADNc est utilisé comme sonde pour cribler une banque génomique et le gène humain est ainsi cloné.
L’absence de dominance pour l’hypercholestérolémis familiale s’explique par?
Par l’haploinsuffisance. On s’attend donc à ce que les mutations qui provoquent la maladie inactive la gène -> perte de fonction
Qu’est-ce que l’allélisme multiple?
Il y a plusieurs allèles pour un phénotype.
Qu’est-ce que l’allélisme multiple?
C’est lorsqu’il a plus de 2 allèles connues pour un gène.
Quelle est la différence entre une mutation amorphe et hypomorphe?
L’amorphe ne garde aucune activité décelable de l’allèle sauvage alors que l’hypomorphe en conserve une partie.
Quelle est la différence entre une mutation amorphe et hypomorphe?
L’amorphe ne garde aucune activité décelable de l’allèle sauvage alors que l’hypomorphe en conserve une partie.
Qu’est-ce qui est responsable de l’hémophilie A?
Des mutations récessives du gène du facteur VIII. Ce facteur est essentiel pour la coagulation normale du sang.
