Chap 2 Techniques De Biochimie

Question 1

Définir la cristallographie
Et donner le principe général

Les avantages et inconvénient

Answer 1

La cristallographie est la science qui étudie les cristaux et leur propriété

Principe : on fait diffracter des rayons x dans un cristal.
Les rayons x sont collecté par le synchrotron
Le périodicité du cristal permet aux ondes de diffusé par chaqune des mailles. On a besoin d’un ordinateur et d’une détecteur.

Avantage : haute résolution, haut débit, pas de limite de taille

Inconvénient : besoin d’un cristal ordonne difficile à faire

Question 2

Définir la RMN
Donner le principe
Les avantages et les inconvénients

Answer 2

-on étudie la résonance des noyaux (spin).
-pour cela on détermine la fréquence de chaques spins.
On déterminera la structure à partir d’information géométrique ou une étude d’interaction

Principe : l’observation des transition entre des niveau d’énergie entre 2 nv m=-1/2 et m=1/2

• on collecte des molécules
• on fait la collection des spins
• on a une transforme de Fourier
• on les observe sous différents jeux

Avantage : en solution dynamique
Inconvénient : bas débit taille < 100 Kda

Question 3

Définir la CryoEm
Principe
Avantage et inconvénients

Answer 3

La cryo Em permet de déterminer la structure des protéines. On utilise des électrons pour imagée des molécules gelés Sur un détecteur.

Principe :
Électrons envoyé sur un échantillon gelé et détection par une détecteur à électrons
-on a besoin d’un microscope à transmission électrons
-projection 2D et reconstitution 3D
-échantillon congeler dans l’eau
-dose faible répartion
-automatisation

Avantage : solution dynamique, résolution atomique, protéine membranaire
Inconvénient : bas débit, taille super à 100 kda , cout eleve et temps de calcul élevé

Question 4

Donner le principe de l’ultrfiltration d’un mélange protéique

Answer 4

• technique de séparation en séparant les molécules selon leur poids moléculaire
• on choisira notre cut off qui est un seuil ( more) pour permettre de séparer les protéines. On choisi notre système en fonction des protéines

Cette technique permet aussi de reduire les concentration d’un milieux

Question 5

Chromatographie échangeurs d’anion

Comment décrocher les molécules sur la résine ?

Answer 5

• elle sépare les molécules selon leur groupes de charges respectifs
• on utilise une résine cationique
• l’ajout de l’analyte doit se faire dans un tampon basique pour remplacer le contre-ion de la résine par selui de l’ion soluté

2 méthode pour décrocher :

• on change le pH, on met un pH acide qui rendra les molecule positive, elle se décrocheront de la résine
• on décroche dans du NaCl car les cl- vont décrocher la protéine fixe par compétition ( en choisissant un concentration en nacl adapte )

Question 6

Technique de SDS page

Answer 6

Permet de séparer les protéines en fonction de la masse moléculaire de la chaîne polypeptidique. On fait une electrophoresis sur gel de polyacrelamide contrant du SDS
On révèle les protéines au Bleu de Coomassie

Question 7

Expliquer la chromatographie d’exclusion

Answer 7

Technique qui permet de séparer les molécules en fonction de leur taille et de leur forme.
On utilise pour cela des granules poreux.
Les grosses molécules ( qui ont un diamètre supérieur à ceux des pores) sont élue au niveau du «niveau mort». Les petite et moyenne molécules sont incluent dans le gel, et donc freiner.
Il existe une relation entre le volume d’elution et le logarithme de la masse moléculaire