biotechnologie Flashcards
Comment peut-on trier des segments d’ADN par une électrophorèse sur gel ?
On place un gel constitué d’un polymère (agarose) sur une plaque. La plaque est ensuite submergée dans un bac de liquide conducteur (solution saline). Des électrodes se trouvent a chaque extrémité du dispositif. On utilise une pipette pour déposer les fragments d’ADN (préalablement sectionnés avec une enzyme de restriction) sur la plaque d’électrophorèse.
Puisque le groupement phosphate des nucléotides transporte des oxygènes chargés négativement, les molécules d’ADN de charge négative se déplacent vers le pôle positif. Les molécules plus courtes se déplacent plus rapidement que les longues, ce qui sépare ainsi les molécules d’ADN en bandes successives.
A la fin du procédé, on coupe le courant et on ajoute un colorant (bromure d’éthidium) qui se lie à l’ADN. Les bandes émettent ainsi une lumière rose lorsqu’elles sont placées sous une lumière UV, le schéma devient donc visible à l’oeil. Chaque bande correspond aux fragments d’ADN de longueurs différentes.
Qu’est-ce qu’un buvardage de Southern ? Comment procède-t-on ?
Une technique permettant de transférer le schéma d’ADN de l’électrophorèse sur un papier buvard, rendant celui ci beaucoup plus facile a manipuler.
On met le bloc de gelose sur un liquide alcalin.
On dépose ensuite une membrane de nitrocellulose (papier buvard) sur le bloc, et plusieurs couches de papier absorbant.
On met ensuite un poids sur le dessus.
Cela produit un papier buvard avec un motif de bandes d’ADN identiques à celles sur le gel.
On peut ensuite isoler les fragments désirés en ajoutant une sonde (substance radioactive) se liant seulement à certains fragments, puis en plaçant une pellicule photographique sur le buvard. La radioactivité de la sonde mènera à la reproduction, sur la pellicule, de l’image des bandes contenant l’ADN dont les bandes sont appariées avec la sonde.
Décrivez la technique permettant d’identifier une personne par ses empreintes génétiques.
Chaque individu possède des minisatellites différents. (séquences de nucléotides répétés en un nombre déterminé de fois dans un segment d’ADN non-codant).
On prélève un échantillon d’ADN (si l’échantillon est minime, on peut procéder à une PCR).
On sélectionne et isole les minisatellites en procédant à une électrophorèse.
Plus le nombre de répétitions de la séquence de nucléotide est petit, plus court sera le segment d’ADN, donc plus loin il migrera sur l’électrophorèse.
En utilisant plusieurs minisatellites différents, le schéma produit par l’électrophorèse sera propre à chaque individu.
