Bioquímica clínica Flashcards
qual a utilidade da bioquimica clínica
- rastreio
- confirmar diagnósticos
- monitorização de doenças
- seleção de tratamentos
- monitorar tratamentos
- estudo das doenças
quais são os passos de um processo de análises bioquímicas?
- questionário clinico
- requesição de formularios com a info clinica
- retirar a amostra do paciente
- transição para o lab
- pacient ID
quais os tipos de testes que podem ser pedidos ao paciente?
- Testes de emergencia (feitos na sala e saiem em no max 24h)
- Point-of-care testing
- regular screening
- organ panel (inclui marcadores de funcionamento dos orgãos)
- molecular testing
Uma punção lombar normal tem que aparencia normal?
transparente, sem cor
que biospecimens se podem analisar?
- culturas de sangue
- urina
- fluido cerebro-espinhal
- saliva
- pleura
- liquido sinovial
- fezes
que cor é o tubo para se fazer testes ao sangue de rotina?
verde
que cor é o tubo para se fazer testes ao sangue de coagulação
azul
que cor é o tubo para se fazer testes ao sangue de heograma?
roxo
que cor é o tubo para se fazer testes ao sangue de DNA/ HIV
amarelo
que cor é o tubo para se fazer testes ao sangue de glucose, lactase, alcool
cinzento
que cor é o tubo para se fazer testes ao sangue de imuno e serologicos
vermelho
o que é que importa no manuseamento da amostra?
- temperatura
- agitação
- recolha
- proteção à luz
- labelling
o que se deve ter em atenção na transferência das amostras para o lab?
- request forms
- tube position
- temperature
- proteção à luz
quais são os critérios para haver rejeição da amostra?
- questionários em falta ou incompletos
- missing labels
- especiemns em mas condições
- especiemns em temperaturas más
- amostras em pouca quantidade
em que se baseiam tecnicas de espectroscopia?
na interação de feixe de luz com a amostra, avaliando a sua atenuação, absorção, dispersão, reflexão e transmissão
a espectroscopia baseia-se em que lei?
lei de beer-lambert: a concentração de uma substância é diretamente proporcional à luz absorvida num certo c.d.o.
o que se pode estudar com espetroscopia?
- concentrações
- estrutura do composto
- estudar a cinética
- detetar grupos funcionais
- obter o comprimento de moleculas ou substâncias
o que permite a tecnica de espectroscopia UV? (c.d.o.: 190 - 900nm)
confirmar a presença de analitos medindo a sua concentração para um dado cdo, além disso tb dá info sobre a cinética da reação
Antes de uma análise de espectroscopia UV é relevante…
- escolher a covete certa com base no cdo
- escolher o cdo
- calibrar
em que se baseia o método da colorimetria?
deteção de mudanças de cor, pode ser quantitativo se combinado com espectroscopia
o que é que permite a colorimetria?
- confirmar a presença de analitos
- medir a sua concentração
- ver mudanças conformacionais
o que permite a transformada de fourier de espectroscopia infravermelha?
permite conhecer a estrutura molecular com base na deteção de ligações atómicas
o que é a espectroscopia de Massa?
mede a razão massa/carga de um analito. A amostra é bombeada com um feixe de Eletrões, ionizando-se (cargas positivas).
Após a ionização as particulas são sujeitas a um campo elétrico e magnético, havendo diferenças de acordo coma tal razão
os iões são detetados exibindo um espectro de intensidades
o que é a espectroscopia de ressonância magnetica nuclear?
estuda a interação entre uma radiação EM com os núcleos das moleculas, quando sujeitas a um campo magnético
dá info sobre a estrutura dinâmica e interação de moleculas biológicas
como funciona a citometria de fluxo?
a amostra atravessa um feixe laser, sendo a radiação dispersa é detetada e caracteristica de cada componente
Nota: requer coloração
o que é a Classificação de células ativadas por fluorescência (FACS)?
é um tipo particular de citometria de fluxo que permite a separação das celulas com base nas suas caracteristicas físicas
Usa anticorpos especificos com corantes fluorescentes
no que consistem em geral tecnicas de cromatografia?
separação da mistura nos seus vários componentes
em que consiste a cromatografia de papel?
o fator de distinção é a diferença de tempo de migração pele folha
a cromatografia de papel é usada para separar o quê?
aminoacidos, peptidos, hidratos de carbono, purinas, compostos organicos e iões
quais são as 2 principais vantagens da cromatografia em papel?
é barato e requer pouca quantidade de material
o que é cromatografia de camada fina (TLC)?
é igual à em papel, mas com vidro/plastico com uma camada fina de um absorvente
permite chegar ao fator de retenção (Rf-valeu= distance component/distance solvente))
na TLC se o Rf value é muito pequeno significa que…
o componente viaja pouco, ou seja é polar (e vice versa)
em TLC as amostras têm de ser soluveis?
sim
a TLC dá info quantitativa e qualitativa?
não, só dá quantitativa
em que consiste a cromatografia de size-exclusion (SEC)?
separação de proteínas de outros compostos atendendo ao seu tamanho relativo (coluna estacionária porosa) - os mais pequenos migram mais
em que consiste a cromatografia Ion-Excharge (IEC)?
separa iões baseado na afinidade iónica
há uma fase estacionária ionizada que interage com iões de carga oposta
as moleculas são retidas com base na sua carga, que que não interagem com a coluna são as primeiras a sairem
em que tipo de amostra é que a HPLC é usada?
em líquidos
em que se baseia a HPLC?
a fase móvel é bombeada numa coluna com pequenos poros (fase estacionária)
as diferenças de solubilidade dos componentes fazem com que estes tenham diferentes velocidades
Os componentes são detetados por espetroscopia de absorção
O tempo de retenção é característico de cada componente
na HPLC o que é importante garantir?
que não entrem bolhas na coluna
o HPLC é um método quantitativo?
sim, através da área de baixo do pico
em que consiste a Eletroforese?
Na migração das cargas num meio líquido sob um campo elétrico, que faz mover as partículas
onde é que se usa eletroforese
para separar DNA, RNA e proteínas, com base no tamanho e na carga
(as moléculas pequenas migram mais rapidamente, porque têm maior facilidade em atravessar os poros)
os testes bioquímicos podem ser de que tipo?
Moleculares e Serológicos
qual é a diferença entre testes moleculares e testes serologicos?
Moleculares: amplificam o material genético viral e o seu sinal. Detetam sequencias de ácidos nucleicos associados a agentes patogénicos ou marcadores
Serológicos: detetam anticorpos que se ligam a antigénios virais
qual é o outro nome para testes serológicos?
testes imunológicos
testes serológicos avaliam a resposta imonulógica após vacinação?
sim
que tipo de estes esão incluidos nos testes serológicos?
- testes rápidos
- ELISA
- FIA
- CLIA
- western blot
- testes de neutralização
- testes de aglutinação
testes moleculares identificam mutações genéticas?
sim
as moleculas alvo dos testes serológicos e moleculares são…
antigénios/anticorpos e ácidos nucleicos, respeticamente
qual é o principio de deteção dos testes serológicos e moleculares?
resposta imunitária e amplificação de DNA/RNA, respetivamente
entre os teste serológicos e moleculares, qual deles têm maior sensibilidade e especificidade?
testes moleculares
quais são os passos de testes serológicos?
- seleção do antigénio/ anticorpo
- imolubização dos antigénio/ anticorpo
- inoculação da amostra na microplate
- lavagem da microplate
- deteção dos complexos - ELISA/ FIA/ CLIA
- medição do sinal por quantidade de anticorpo
quais as 3 principais caracteristicas de testes rápidos?
- resultado em min
- usam tecnicas de fluxo
- usadas para diagnostico de doenças infecciosas
em que consiste o método de ELISA?
os anticorpos são ligados a enzimas para deteção de antigénio na amostra
este é um método com elevada sensibilidade e especificidade
quais são os passos da ELISA?
- imobilização da molecula
- inoculação da amostra
- diluição dos anticorpos
- adição de anticorpos marcados com enzimas
- adição de um substrato para catalizar enzimas
- análise com espectrometria
quantos métodos e quais existem de ELISA?
4 - direto, indireto, sandwich e competitivo
em que consiste o método direto de ELISA?
a molécula é diretamente imobilizada e os anticorpos marcados com enzimas podem logo ligar-se à molécula de interesse
simples e baixa sensibilidade
em que consiste o método indireto de ELISA?
usa-se um anticorpo secundário, não havendo lig direta do anticorpo com a enzima ao antigénio
isto amplifica o sinal e aumenta a sensibilidade
em que consiste o método sandwich de ELISA?
aqui não é a estrutura de interesse que se liga à superfície sólida, mas sim um anticorpo e depois é como se fosse o indireto
em que consiste o método competitivo de ELISA?
o anticorpo capturado é fixado na superfície sólida e incubado com a amostra e com um antigen competidor, havendo uma competição para ver quem se liga ao anticorpo
mais lig anticorpo-enzima = mais escura a cor
em que consiste o método CLIA?
os anticorpos têm marcação quimiluninescente para deteção de antigénios, a quanificação faz-se com base na luz emitida na sequência de reações químicas
análise quantitativa e com alta sensibilidade
quais são as diferenças entre ELISA e CLIA?
uma deteta a ligação entre a molecula imobilizada e a molecula ligada à enzima e a outra deteta luz
a CLIA tem maior sensibilidade ma é mais cara
para que é que é usado o método de Western blot?
para detetar a presença, o tamanho, e a quantidade de proteinas, tendo uma sensibilidade média
quais são os passos do metodo de Western blot?
- separação de proteínas
- transferência para membrana
- staining
- gera-se um sinal para deteção de filmes
o que são testes de neutralização?
avalia a capacidade de uma molécula (agente neutralizador) afetar a atividade biológica de uma molécula alvo
com base na viabilidade celular, replicação viral, atividade enzimática, …
o que são testes de Aglutinação?
baseiam-se na aglutinação de células/ bactérias/… na presença de determinado anticorpo/ antigénio
quando o anticorpo de liga a multiplos antigénios formam se agregados fáceis de ver
é um estes rápido e simples, qualitativo ou semi-quantitativo
PCR é um teste molecular ou serológico?
molecular
no que consiste um PCR
a DNA polimerase sintetiza novas cadeias de DNA seguindo o primer
É usado para sequencias de DNA, análise de expressão genética
quantas fases e quais tem um PCR?
3 fases:
Denaturation: Separação das cadeias de DNA por aquecimento
Annealing: os primers ligam-se à cadeia
Elongation: ação da DNA polimerase
para que serve a reverse transcription polymerase chain reaction?
permite a amplificação de segmentos de RNA
a transcrição reversa pega em RNA e cria uma cadeia de DNA (util para detetar virus) e depois faz-se um PCR
o que faz a sequenciação de ácidos nucleicos?
permite determinar a ordem precisa das bases de nucleótidos
permite identificar doencas genéticas e compreender o risco de uma pessoa vir a desenvolver uma doença
o que é um teste de cultura?
cultivo e crescimento de microorganismos a partir de bioespécimes obtídos dos pacientes
que tipos de culturas há?
solidas, líquidas e celulares
em que é que se baseia o controlo de qualidade?
precisão
consistência
exatidão
->Fidelidade
em que consiste o controlo de qualidade interno?
- regulação regular
- amostras de controlo
- testes paralelos
em que consiste o controlo de qualidade externo?
- comparação inter-laboratorio
- participação em testes de eficiência!
