3. Imuno-histoquímica Flashcards
para que servem análises imuno-histoquímicas?
detetar a presença de marcadores de proteínas especificas
o que se consegue ver com análises imuno-histoquímicas?
- morfologia das células
- sinalização celular
- mecanismos da célula
- localização de proteínas
em análises imuno-histo o staining vem depois de que parte?
sectioning
quais são os passos a seguir para fazer uma análise imuno-histo?
- retirar a parafina e reidratação
- antigen retrival
- blocking
- coloração
- contracoloração (se necessário)
- stabilizing with mounting medium
- Ver a coloração ao microscópio
como é retirada a parafina e feita a reidratação?
imersão da parafina num solvente em que ela é solúvel (xileno) e mergulha-la em solventes decrescentes de álcool
o que é antigen retrival?
é um método de fixação dos tecidos, que bloqueia a ligação na epitope a outras proteínas, restauranto a epitope-antybody
que tipos de antigen retrival há? e quais as diferenças?
HIER (+ comum) e PIER
a HIER é induzida por calor, altamente sensível a pH, temperatura, tempo e buffer
a PIER é induzida por proteoloticos como as proteínas K, trypsin e pepsin, a amostra é inculada só a 37ºC
para que é usado o blocking?
para minimizar ligações nao especificas a anticorpos
em que se baseia a coloração imuno-histo?
na seleção de anticorpos que reagem com antigenes marcados
qual é a diferença entre coloração direta e indireta
Direta:
- 1 passo
- lig direta entre o anticorpo e o antigénio especifico
- sinal fraco
- mais caro (anticorpos diretos marcados)
Indireta:
- multi-passos
- um anticorpo primário não marcado liga-se ao antigen
- um segundo anticorpo liga-se ao primeiro, este já está marcado e pode ser menos especifico
- mais barato
em que consiete o labelling de anticorpos?
em marcá-los com um reagente flourescente ou cromogénico
no caso do sinal ser muito fraco o que se faz?
tecnicas de amplificação do sinal, criando várias ligações
- Avindin - biotin complex (ABC): 4 binding sites, tradicional
- labelled streptavindin - biotin (LSAB): complexo mais pequeno
- palymer- based: menos passos
(todos métodos indiretos e estão por ordem crescente de sensibilidade)
para que serve a contracoloração?
para dar info morfológica adicional
para que serve staining with mounting medium?
estabiliza, aumenta a fluorescência e reduz o photobleaching
sistemas de classificação de neoplasias são baseados em quê?
- prognóstico (benigno, maligno e borderline behavior)
- histopenico (epitelial, conectivo, muscular, neural,..)
- TNM
em que se baseia a classificação de tumores TNM
T - tamanho do tumor
N - nodulos linfaticos
M - metastases
na classificação TNM quantos níveis há em cada?
T: 1 - 4 (quando rompe a pele e se cola
N: 0 - 3 (nodulos muito inchados)
M: 0 - 1 (tem metastases)
que outros sistemas de classificação de neoplasias é que há? tirando o TMN
Nottingham grading system: mais usado para cancro da mama (notas de 1 a 3)
- glandular
- nuclear pleomorphism
- mitose
FIGO grading system: cancro cervical (stage I a IV): nota de 1 a 3
Wilms tumor staging: cancro do rim (nota de I a V)
Gleason’s score: prostata (nota de 1 a 5)
qual é a origem de coleta de um biospecimen de amostras histológicas?
biopsias, autopsias, necropsias
qual é a origem de coleta de um biospecimen de amostras citológicas?
urina, sangue, fluidos, …
qual é a utilidade da histologia?
- dá info sobre sistemas vivos
- diagnóstico e stagiamento
- prognóstico
- seleção de tratamentos
- descoberta de drogas
- determinar caucas da morte
de que é que dependem as análises histológicas?
- tipo de amostra
- quantidade de cortes preparados
- info adicional como a dada na anamnese
- corte representativos
- limitação dos equipamentos disponíveis
- resolução dos microscópio
que estratégias complementares à histo-patologia existem?
- reconstrução 3D
- microscopia de flourescencia
- Microscopia eletronica
- Atomic force microscopy
- estratégias computacionais
porque é que a recontrução 3D é util?
porque os cortes feitos podem não ser representativos de todo o tecido e é difícil analisar vários cortes em separado
é suficiente preparar cortes sequenciais de aplicar volume redenring methods?
NO, o tecido pode estar deformado, podendo tb estar associados a diferentes ângulos de rotação
há necessidade de alinhar os cortes para análise?
sim
o que torna possivel a reconstrução 3D?
- identificar ROI
- quantificar o tanhamos de tumores
- ter conhecimento da dimensões 3D
quais são as desvantagens da reconstrução 3D?
- alto custo
- computacional power
- ficheiros pesados
- tendencia de se perder a amostra que pode vir a ser necessária
o que permite a microscopia de fluorescencia?
identificar moléculas biológicas especificas, através de um corante especifico
permite a expressão de multiplos biomarcadores na mesma imagem (diferentes cores), mas os espectros da cores não devem se sobrepor, e é boa prática que o corante menos intenso signifique menos quantidade
Porque é que a microscopia eletronica e util?
porque há estruturas que não se conseguem ver com microscopia otica
quais os 2 tipos de microscopia eletronica?
SEM (3D) e TEM (2D)
quais são as denvantagens a EM face à otica?
- máquinas maiores,
- usa feixes de eletões
- funciona no vacuo
- só estuda organismos mortos ou secos
- cor preta e branca
- a amostra tem de ser muito fina
- caro
a SEM baseia-se na deteção de eletrões transmitidos?
NAO, na dispersão de eletões
A TEM baseia-se na deteção da dispersão de eletrões?
NÃO, na deteção da transmissão dos eletões
A AFM (atomic force microscopy) gera imagens 3D?
Sim
quais as vantagens da AFM face à EM?
- nao requer vacuo
- não é necessário uma preparação intensiva da amostra
- permite medir a força de adesão, forças magnéticas e propriedades mecânicas
Quais são as vantagens do uso de tencicas de computação?
- diminui o trabalho de lab
- minimiza o erro humano
- permite diagnosticos mais rápidos
quais são as esvantagens do uso de tecnicas computacionais?
- Alto poder computacional
- é necessária uma grande validação dos métodos de preveem outcomes
- são necessárias equipas multidisciplinares
