Aula 8 e 9

Question 1

Quais os tipos de coloração que existem?

Answer 1

Simples (detetar a presença e avaliar a forma geral das bactérias); diferenciais (distingue características das bactérias) e estruturais (evidência estruturas específicas das bactérias)

Question 2

Qual o objetivo da coloração Gram? Em que se baseia? De que cor coram os diferentes tipos de bactérias?

Answer 2

Permite distinguir bactérias gram positivas (roxas/púrpura) de bactérias gram negativas (vermelho/rosa). Baseia-se nas propriedades da parede celular das bactérias.

Question 3

Qual o objetivo da coloração de Ziehl-Neelson? Qual o outro nome para esta coloração? De que cor coram os diferentes tipos de bactérias?

Answer 3

Permite distinguir bactérias álcool-ácido-resistentes (vermelho) daquelas que não o são (azul). Um exemplo do primeiro tipo é o bacilo da tuberculose. Outro nome para esta coloração é coloração álcool-ácido-resistente.

Question 4

Como é feita a coloração de Gram?

Answer 4

1) Usa-se o corante báscio violeta de cristal - é um corante primário que cora todas as células. 2) Solução de iodo (lugol) - mordente; estabiliza o corante primário. 3) Lavagem com etanol ou acetona - descorante que solubiliza lípidos. Apenas as bactérias gram-positivas retêm o violeta de cristal. 4) Contrastante, sendo mais comum o uso de safranina - cora as bactérias gram-negativo de rosa/vermelho e as gram-positivo de violeta escuro.

Question 5

Quais são as bactérias que não coram pela coloração Gram?

Answer 5

Micobactérias.

Question 6

Como é feita a coloração de Ziehl-Neelson?

Answer 6

1) Fucsina de Ziehl - corante primário, isto é, entra em todas as células. Aquece-se a amostra +ara aumentar a fluidez dos lípidos e facilitar a entrada de corante. 2) Álcool e ácido, sem presença de calor - descorante que retira a fucsina das células que não são álcool-ácido resistentes. 3) Contrastante, como o azul de metileno, que permite visualizar as bactérias descoradas no passo anterior e que, por isso, ficam azuis.

Question 7

Porque é que as células álcool-ácido resistente retêm a fucsina?

Answer 7

Devido ao seu grande conteúdo lipídico, em particular, o ácido micólico.

Question 8

Diga quais são as 5 funções da parede bacteriana:

Answer 8

Responsável pela forma da célula; determina o comportamento Gram; protege a célula da lise osmótica; pode contribuir para a patogenecidade; pode proteger de substâncias óxicas.

Question 9

A parede celular protege a célula da lise? E da plasmólise?

Answer 9

Apenas protege da lise.

Question 10

Protoplasto?

Answer 10

Célula completamente destituída de parede celular.

Question 11

Esferoplasto?

Answer 11

Célula com alguns resíduos de parede celular?

Question 12

Qual a importância da plasmólise? E da lise osmótica?

Answer 12

A plasmólise é útil na conservação de produtos alimentares. A lise osmótica vai ser o mecanismo de morte usado pela lisozima e pela penicilina, através de alteração da parede celular.

Question 13

Como são constituídas as fibras do peptidoglicano?

Answer 13

As fibras paralelas são constituídas por 2 tipos de açúcares: NAM (ácido N-acetilmurâmico) e NAG (N-acetilglucosamina) que estão ligados alternadamente. As fibras entrecruzadas dão estabilidade ao peptidoglicano e são constituídas por 4 aminoácidos L e D alternados que se ligam ao NAM; ligam duas cadeias adjacentes. Em algumas bactérias, as duas cadeias adjacentes não estão ligadas diretamente, mas por uma ponte de 5 glicinas (ex, Staphylococcus aureus).

Question 14

Qual a importância do NAM a nível farmacológico?

Answer 14

NAM é uma molécula exclusiva das bactérias, pelo que podemos usar antibiótico específico para inibir a sua síntese sem afetar os outros sistemas do hospedeiro.

Question 15

Refira 4 objetivos do estudo da parede celular:

Answer 15

Distinguir bactérias gram positivas de gram negativas; é um componente único dos procariotas; importante alvo de mecanismos de defesa inata dos vertebrados; alvo de antibióticos.

Question 16

No Homem existem D-aminoácidos no peptidoglicano?

Answer 16

Não, apenas L-aminoácidos. Isto vai ser usado em fármacos que atacam/reconhecem D-aminoácidos.

Question 17

Qual a sequência base de aminoácidos no peptidoglicano da parede?

Answer 17

1º aminoácido é a L-alanina e o último é a D-alanina.

Question 18

O que são moléculas quirais?

Answer 18

É o caso dos aminoácidos L e D. São moléculas que são a imagem no espelho uma da outra, pelo que rodando de todas as formas possíveis a molécula L, nunca vamos obter a configuração D, e vice-versa.

Question 19

DAP (ácido diaminopimélico)? O que acontece se este estiver em menor concentração?

Answer 19

Aminoácido derivado do carboxilo épsilon da lisina, característico das ligações cruzadas no peptidoglicano da bactérias gram-negativas. Quando há défice de DAP, há na mesma crescimento bacteriano, porém associado a incapacidade de formar uma nova parede de peptidoglicano. É o ponto de união das lipoproteínas de Braun.

Question 20

Onde ocorre a formação de peptidoglicano?

Answer 20

Começa no citosol e termina no espaço periplasmático, isto é, entre a membrana e a parede celular. A transferência entre os dois espaços faz-se através do bactoprenol.

Question 21

Descreva a 1ª fase da síntese de peptidoglicano, que ocorre no citosol:

Answer 21

A glucosamina é convertida enzimaticamente a NAM e depois ativada energeticamente por uma reação com a uridina trifosfato (UTP), formando o UDP-NAM. Juntam-se os quatro aminoácidos formando o UDP-NAM pentapéptido.

Question 22

Descreva a 2ª fase da síntese de peptidoglicano:

Answer 22

O UDP-NAM pentapéptido dirige-se para a membrana citoplasmática, onde se vai ligar a uma molécula de bactoprenol e à N-acetilglucosamida. Algumas bactérias adicionam uma cadeia de pentaglicina ao aminoácido na 3ª posição para alongar o cross-linking.

Question 23

Descreva a 3ª fase da síntese de peptidoglicano:

Answer 23

A associação com o bactoprenol permite a transferência do UDP-NAM pentapéptido e da NAG para a membrana periplasmática.

Question 24

Descreva a 4ª fase da síntese de peptidoglicano:

Answer 24

Transpeptidação: ligação cruzada entre subunidades adjacentes de peptidoglicano.

Question 25

Onde atua a cicloserina, na síntese do peptidoglicano?

Answer 25

Inibe especificamente as enzimas envolvidas na formação da D-alanina e da L-alanina, o que compromete a sua incorporação para formar NAM.

Question 26

Onde atua a bracitracina, na síntese do peptidoglicano?

Answer 26

Bloqueia o bactoprenol, impedindo a reciclagem deste composto e o crescimento das bactérias.

Question 27

Onde atua a vancomicina, na síntese do peptidoglicano?

Answer 27

Inibe a transpeptidação. No caso das bactérias gram negativas, atua na ligação direta ente aminoácidos de cadeias adjacentes. Nas bactérias gram-positivas, atua na ligação das 5 glicinas.

Question 28

O que é a transpeptidação? O que acontece se bloquearmos este passo?

Answer 28

Ligação cruzada entre as cadeias adjacentes de peptidoglicano, que ocorre na fase final da síntese. Se bloquearmos a transpeptidação não bloqueamos o crescimento de bactérias e não provocamos a sua morte, apenas não ocorre cross-linking.

Question 29

O que são as transpeptidases? Como é que a sua atividade é afetada pela penicilina?

Answer 29

Enzimas responsáveis pela formação de ligações peptídicas entre as várias subunidades de peptidoglicano. A sua atividade é bloqueada pela penicilina.

Question 30

Onde atua a autolisina, na síntese do peptidoglicano? Como é que a sua atividade é afetada pela penicilina?

Answer 30

Permite a incorporação de novas bases no peptidoglicano. Podem ser glicosidases (cortam a ligação glicosídica) ou amidases (corta a ligação peptídica). A atividade das autolisina aumenta quando é administrada penicilina, gerando um peptidoglicano fragmentado.

Question 31

Qual é a ação da lisozima sobre o peptidoglicano?

Answer 31

Cliva ligações glicosídicas. Por isso, constituí uma das nossas defesas inatas em relação à infeção bacteriana. A lisozima faz parte das nossas secreções: lágrimas, saliva e suor.

Question 32

Caracterize a parede celular das Archaebacteria:

Answer 32

Apresenta parede sem peptidoglicano, mas com pseudoglicano.

Question 33

Caracterize a parede das eubactérias Mycoplasma

Answer 33

JAGÃO! As Mycoplasma não têm parede, pelo que são pleomórficas, isto é, não têm uma forma muito bem definida. Além disso, apresentam colesterol nas suas membranas, apesar de não ser sintetizado pelas bactérias, mas obtido das células animais.
Por não terem penicilina, são completamente resistentes à penicilina. Além disso, são parasitas obrigatórios.

Question 34

Caracterize a parede das bactérias gram-positivas:

Answer 34

Peptidoglicano + ácidos teicóicos + ácidos lipoteicóicos. Os ácidos teicóicos estão ligados diretamente ao NAM do peptidoglicano; são polímeros de glucerol ou ribitol com aminoácidos; compostos de carga elétrica negativa; importante na estabilização da parede das bactérias ou de enzimas, na patogenicidade e no reconhecimento peo sistema imune inato. Os ácidos lipoteicóicos têm a causa lipídica ancorada ao lípidos da membrana citoplasmática.

Question 35

Caracterize a parede das bactérias gram-negativas:

Answer 35

Camada mais fina de peptidoglicano e membrana externa que são mantidas unidas pela lipoproteína de Braun. Com porinas e LPS no folheto externo. LPS é uma molécula extensa, com três partes: lípido A (endotoxina), polissacarídeo central e antigénio O.

Question 36

O que acontece quando os PAMP (Pathogen-associated molecular pattern) se ligam a PRR/TLR?

Answer 36

São desencadeadas cadeias sinalizadoras que resultam na produção de citocinas e quimiocinas específicas: citocinas pró-inflamatórias (IL-1, TNF-alda, IL-6) e IFN do tipo I.

Question 37

Qual a importância do antigénio O?

Answer 37

Classificação da espécie/serotipo; evasão imunológica.

Question 38

Qual a importância do lípido A?

Answer 38

O lípido A do LPS liga-se ao TLR4 e induz a libertação de citocinas pró-inflamatórias, nomeadamente TNF e IL-1. Desenvolve-se uma resposta inflamatória, com aumento da permeabilidade vascular, vasodilatação e outras alterações sistémicas que comprometem as funções respiratórias e cardíacas, podendo levar a choque séptico.

Question 39

Periplasma?

Answer 39

Fluído que preenche o espaço periplasmático. No periplasma das bactérias gram-negativas há enzimas periplasmáticas com funções a nível da aquisição de nutrientes, transporte de eletrões, síntese do peptidoglicano e modificação de compostos tóxicos. Nas bactérias gram-positivas, são secretadas exoenzimas.