aula 6 Flashcards
O patologista analisa apenas 1-2 secções por amostra pq é mais rápido, mas é tmb menos representativo, o que se deve fazer então?
reconstrução 3D de várias secções
é suficiente preparar cortes e aplicar métodos de aumento de volume 3D?
não, o tecido pode estar deformado no corte e diferentes secções podem ter diferentes localizações e ângulos
Logo é necessário alinhar as várias partes do tecido manual e computacionalmente
Quais as desvantagens deste método 3D?
-elevado custo e tempo
-necessidade de treino computacional
-armazenamento de daods
-as amostras são perdidas, não podem ser reutilizadas
o segundo método que estamos a ver é a microscopia de fluorescência para identificação de estruturas e biomarcadores, o que é que isto permite?
identificação de moléculas específicas, combinando diferentes moléculas específicas com diferentes afinidades
aspetos importantes sobre os espetros de fluorescência
- os espetros não se devem sobrepôr
- a intensidade da fluorescência deve estar relacionada com a expressão/ abundância das proteínas
microscopia eletrónica (ME) para melhor detalhe em pequenas estruturas, qual é a diferença vs Microscopia ótica (MO)?
na microscopia eletrónica
equipamento grande
feixe de eletrões e não de fotões
vácuo (cél mortas)
imagens a preto e branco
na microscopia ótica (é o oposto)
não permite distinguir pequenas estruturas como vírus, membranas e organelos.
tipos de ME
SEM (ME por varrimento)
-imagens 3D de superficie
-amostras previamente cobertas por camada fina de metal
TEM (ME de transmissão)
-imagens 2D
-amostras finas o suficiente para que o feixe de eletrões seja transmitido
LM vs SEM e TEM
-feixe de luz e não de eletrões
-espécie pode estar vivo ou morto e não só -morto ou ressequido
-é colorido
-segue stainging procedures e não coisas com metais
-imagens 2D
o que permite a microscopia de força atómica?(AFM)
Permite o estudo da topografia e propriedades mecânicas das amostras com base nas forças de interação entre a sua superfície e a sonda
permite obter imagens de superfície 3D de materiais não condutivos
Vantagens da AFM face à ME
não requer vácuo logo as mostras podem estar nas condições fisiológicas
não exige preparação exigente das amostras
permite identificar tecidos através da suas propriedades mecânicas e ajudar a classificar
AFM para estudar celulas e tecido mecânico o que se verificou
o modelo de young demonstrou uma grande deformabilidade de tecido canceroso comparando com o saudável isto pode indicar mudanças na matriz extracelular por overexpression e alinhamento proteico
VANTAGENS e desvantagens de estratégias computacionais como apoio aos fisiologistas
vantagens
-diagonostico mais rápidos
-minimizam o erro humano e a carga de trabalho
desvantagens
-exigem muita validação e poder computacional
-exigem equipas multidiscipilinares
