aula 4- preparações de amostras Flashcards
quais são os passos de preparação (6)
1) colheita de espécies biológicas
2) fixação tecidular
3) corte e transf de cassetes
4) processamento dos tecidos
5)seccionamento
6) staining
sobre colheita de células biológicas (tipo e exemplos)
podem ser sólido (pela cirúrgica) ou liquido (sangue)
instrumentos a usar na colheita
agulha, bisturi, pinça, aspiração a vácuo, espátula
a colheita vai suportar que técnicas
endoscopia, ultrassons, fluoroscopia, mamografica, CT e MRI
NO FIM DA COLHEITA É MT IMPT LABELING COM…
local e data, tipo de amostra, ID do paciente, teste requerido
tmb especificações e se tem um estado de risco elevado
DEVE SER ESCRITO A LÁPIS DE CARVÃO
sobre fixação tecidular (2) quais são as vantagens
previne e protege:
-previne a autolise e putrefação
-previne contra microorganismos e alterações morgológicas
-endurece o tecido, o que facilita o seccionamento
-imobiliza os tecidos
fixação química (DEVE SER RÁPIDA) (2.1)
deve ser escolhida com base:
–taxa de difusão (qt > : < tempo de fixação)
–taxa de fixação (depende da natureza quimica)
–endurecimento
–propriedades de osmore e pH semelhantes à dos tecidos
–funciona com tmb ñ mt altas para ñ haver desnaturação
–alta afinidade para corantes
tipos de agentes fixadores químicos
-aldeídos
-agentes oxidantes
-mercúrios
-alcoóis
-picratos
mas os mais usados são a formalina (fixador universal 10ml /cm^3 de tecido) e o glutaraldeído
tipos de fixação química
->imersão -mergulhar a amostra no agente fixador
->perfusão -introduzir o agente no sistema vascular
fixação física (2.2) pode ser por:
congelamento/vitrofação (com um crioprotetor)
liofilização(remove-se a água por sublimação)
Aquecimento (através de microondas)
No corte e transf para cacetes (3) - o que se faz na Tp deve se:
-cortar amostras com bisturi (4mm- cortes finos mas amostra grande)
-as amostras devem estar armazenadas em formalina (tipo um concervante)
-no fim tem de se fazer o labeling
NOTA- algumas estruturas rígidas exigem descalcificação, aquela cena da casca do ovo
O processamento de tecidos (4) serve para cortes (<20-30 micrometros), apesar de a fixação (2) endurecer os tecidos, não endurece ao ponto de conseguir cortes tão finos então quais são os processos neste tópico?
-congelamento -10-50micrometros - usa um criptoprotetor para evitar danos e formação de cristais
-embedding (incorporação) -10mm a 10 micrometros -infiltra-se um liquido (parafina(ML) ou resinas acrílicas (ME)) nas amostras que não interfira com as suas propriedades
Embedding requer
Desidratação utilizando o aumento de [] do álcool
clareamento - álcool subst por xilema (meio hidrofilico para hidrofóbico)
embedding - Incorporação com parafina (cera)
No seccionamento (5) as amostras são colocadas em laminas e de seguida:
1) remoção da cera e arrefecimento
2)Fitas de tecido em banho quente
3) secagem da lâmina
No último passo (6) staining o que acontece?
irão ser coradas estuturas para evidenciar contrastes
NOTA- se o corante for hidrofilico é necessaria re-hidratação (xileno-etanol-água)
quais os corantes usados em (6) mais comuns?
hematoxina (ácido) e eosina(base) -entre um e o outro é necessário passar por água antes de colocar o outro
estruturas stained formas de ver
movat’s pentachrome- bom para ver o coração, vasos e tecidos conectivos (vermelhos e azul turquesa)
oxone bubu- tecido periodontal (assim amarelo e azul e verde)
oil red o stain - plaquetas e lipidos músculares ( vermelho e azul)
ai há bués já me cansei, ver nos slides, se sair dou um tiro a alguém
