APP-3.5 transformation et transfection Flashcards
je suis l’introduction d’un ADN étranger libre dans le milieu dans une cellule procaryote. ADN linéaire ou plasmide. mon but est de perturber la perméabilité sélective de la membrane.
transformation
je suis l’introduction d’un ADN dans une cellule eucaryote
transfection
je suis le transfert d’ADN entre bactéries par l’entremise de phages (virus)
transduction
quelles sont les étapes de la transformation bactériennes
1)cellules bactériennes sont incubées dans solution à cations 2+ (divalent)= CaCl2
2)cellules ensuite incubées avec ADN libre étrangère
3) changement drastique de la température (choc thermique) OU électroporation (Choc électrique)
qu’est-ce qui permet la transfection d’un organisme complexe, c’est-à-dire l’utilisation de quelles éléments?
1) de souches bactériennes
2)plasmides recombinés adéquats
je suis la technique par laquelle l’ADN incorporé (par bombardement) dans la cellule reste indépendant du génome. L’information génétique contenue peut être exprimée pendant un certain temps, mais sera éventuellement perdue et ne sera pas
transmise pendant la division cellulaire.
transfection transitoire
je suis la technique par laquelle une portion du plasmide s’intègre au génome de la cellule transfectée. Cette nouvelle information génétique est donc transmise lors des prochaines divisions cellulaires. Cela se fait généralement
via des souches bactériennes compatibles à l’organisme.
transfection stable
quelles sont les deux types de transfections stables
1)transfection stable par incorporation ectopique
2)transfection stable par remplacement d’un gène
transfection stable par incorporation ectopique
une portion délimitée du plasmide s’intégrera dans le génome de la cellule de façon aléatoire. Elle peut donc se retrouver dans l’ADN intergénique ou dans un gène…
transfection stable par remplacement d’un gène
L’ADN recombinant est entouré de séquences précises qui permettent l’échange d’une région du génome avec l’ADN recombinant. Cela se fait via des régions homologues.
chez la transfection des plantes, quelles plasmide et bactérie est généralement utilisée
1) plasmide Ti
2)agrobacterium
pourquoi on utilise ce plasmide avec cette bactérie lors de la transfection des plantes?
car le plasmide Ti est le déterminant de la virulence d’agrobacterium en induisant les galles du collet, les gènes de virulence sont échangés pour les gènes d’intérêt par transformation
à quoi servent les border sequence
incorporation du gènes d’intérêt dans le génome de la plante
quelles sont les 2 types de transfection de plantes?
transfection de gamètes
transfection par formation de CALS
quelle plante subit la transfection de gamètes et qu’est-ce que la transfection des gamètes
Les fleurs sont soumises à la transfection. Lors de la fécondation et de la formation de l’embryon, l’ADN recombinant inséré (Adn étranger) dans le génome sera
transmis à toutes les cellules de la prochaine génération.
quelle partie de la plante subisse la transfection par formation de CALS et qu’est-ce que la transfection par formation de CALS et l’utilisation d’un marqueur est nécessaire pour quelle raison
Des sections de tissus sont soumises à la
transfection.
Ces tissus sont ensuite cultivés sur un milieu qui
induit la dédifférenciation (La dédifférenciation signifie que les cellules perdent les caractéristiques de leurs tissus constitutifs. Une cellule dédifférenciée présente des caractères embryonnaires )des cellules. Parmi ces cellules
totipotentes (embryonnaires), celles qui auront incorporé l’ADN recombinant (adn étranger) dans leur génome seront sélectionnées par l’utilisation d’un marqueur de sélection. Il y aura ensuite l’induction de la rédifférenciation des cellules en plantules. Une cellule différenciée deviendra une plante.
décris les étapes de la transfection chez les animaux
1) culture de cellules souches embryonnaires, soit la cultures de blastocytes
2)construction: le vecteur contient des segments d’ADN qui sont homologues à l’ADN cible dans le génome, en plus du gène à modifier et un gène de sélection
3) transfection des cellules embryonnaires par recombinaision homologues, la séquence du génome est échangée par celle du vecteur
4)prolifération des cellules transformées et sélection
5) injection des cellules transformées dans un blastocyte
6) dév d’une souris mutante après quelques générations
