Apoptose

Question 1

quel est le rôle de l’apoptose dans le développement

Answer 1

modelage do’organes, élimination de strcutures, contrôle du nombre et de la qualité des cellules, équilibre mort/prolifération

Question 2

quelles différences entre apoptose et nécrose

Answer 2

apo : condensation du noyau, organites longtemps intacts, pas de lyse cellulaire, bourgeonnement de corps apoptotiques

nécrose : organites altérés, noyau longtemps intact,lyse cellulaire et des organites

Question 3

comment caracteriser la biochimie de l’apoptose

Answer 3

active, energie dépendante, associée à un processus de synthèse protéique

Question 4

à quels évenements moléculaires est associée l’apoptose

Answer 4

flip flop des proteines, alteration de la perméabilité mitochondriale, cascade d’activation enzymatique ( caspase), fragmentation entre les nucléosomes (2-300pb, pas d’inflammation

Question 5

quelles techniques de labo permettent de mettre en évidence l’apoptose ?

Answer 5

southern blot, essai tunnel, iodure de propidium et cytométrie en flux, annexine V, mesure de l’activité des caspases

Question 6

comment fonctionne l’essai tunnel

Answer 6

l’adn se fragmentant dans l’apoptose, on fixe du dUTP sur les extrémités 3’OH ainsi crées qu’on met en évidence par un précipité coloré

Question 7

comment fonctionne la cytométrie en flux à l’IP

Answer 7

on perméabilise les cellules, l’IP s’intercale dans les coupures, cela permet de quantifier l’adn par cellule, si on a un pic inferieur à 2n c’est une apoptose

Question 8

quelles protéines font un flip flop lors de l’apoptose

Answer 8

les phosphatidylsérines : elles deviennent accessibles

Question 9

comment fonctinonne l’annexine V

Answer 9

c’est un composé Ca-dép très affin pour les PS, si on arrive à marquer les cellules avec l’annexine V couplée à un fluorochrome (comme FITC) c’est qu’il y’a apoptose

Question 10

comment mesure-t-on l’activité des caspases

Answer 10

en inhibant les caspases actives avec FLICTA : s’il est fixé cela veut dire qu’on a des caspases actives donc une apoptose, on le détecte car il émet un signal vert

Question 11

quelles sont les trois phases de l’apoptose

Answer 11

induction : appel à des récepteurs de signaux inducteurs (très variés) ; étape reversible

phase de régulation : initiation : activation des caspases 8-9

effection : intégration des signaux par activation des caspases 3-6-7, efflux de Ca ; irreversible

destruction : flip flop des PS, irreversible

Question 12

décrivez les caractéristques des deux voies de l’apoptse

Answer 12

intrinsèque : en réponse à un stimulus, perméabilisation de la mitochondrie, libération de Cyt C / Diablo, activation des caspases

extrinsèque : ligand (ex : Fas-L) se fixe à un TNFR, active une voie impliquant FADD qui active les caspases (3-8)

Question 13

quels sont les différents acteurs moléculaires de l’apoptose

Answer 13

TNFR, caspases, Bcl-2 (inhib casp), protéine cytosolique et mitochondriale, p53

Question 14

caractérisez les caspases

Answer 14

cystéines protéases clivant après aspartate, d’abord connue pour l’activation de l’interleukine 1𝛃, activées par protéolyse, s’auto amplifient. on a 14 caspases pour >40 substrats

Question 15

quelles sont les deux grandes familles de caspases

Answer 15

initiatrices (2, 8, 9, 10) : auto activation

effectrices (3, 6, 7) : protéolyse de substrats spécifiques : rendent l’apoptose irreversible

Question 16

quels sont les substrats des caspases effectrices

Answer 16

proteines structurales, de signalisation, du métabolisme ARN/ADN, facteurs nucléaires et proteines du cycle cellulaire

Question 17

qu’est-ce que Ced4 et ses homologues tels que Apaf-1

Answer 17

protéines activatrices des caspases

Question 18

caractérisez la famille Bcl-2

Answer 18

elles sont transmembranaires avec un double rôle :
pro-apoptotique : Bax, Bad, Bid, Bik
anti-apoptotiques : Bcl-2

elles contrôlent l’ouverture des pores de la mitochondrie, servent d’ancrage aux régulateurs de l’apoptose

si l’une des deux famille est en excès par rapport à l’autre elle exerce son activité

Question 19

quelle est la nature de l’interaction entre la mitochondrie les caspases cyt C bcl-2 Bax VDAC p53

Answer 19

lors de l’apoptose, Bcl-2 est inhibé : on a liberation de cyt c menant à l’activation de caspase 9 et à la formation de l’apoptosome (7x Apaf-1, Cyt C, casp 9) qui active casp 3 ; Bax interagit avec VDAC pour créer le megacanal (p53 régule Bax à la hausse)

Question 20

caractérisez le couple Fas et Fas-L

Answer 20

Fas-L est une glycoprotéine de surface à expression restreinte, présente dans NK, LT activés
Fas est un recepter exprimé dans de nombreux tissus

voie extrinsèque

Question 21

en contexte apoptotique ui exprime TNF 𝛂

Answer 21

macrophages en réponse à un processus infectieux : voie extrinseque

Question 22

après activation de fas comment agit la voie TRAILR

Answer 22

le death domain (DD) du recepteur se fixe à FADD = complexe DISC qui va activer casp 8 qui va activer casp 3

voie extrinsèque

Question 23

quelles sont les caspases inductrices des differentes voie ? et effectrices

Answer 23

ext : 8 : int : 9

effectrice : 3

Question 24

comment les deux voies interagissent

Answer 24

Bid de la voie ext regule la voie int

IAP de la voie int regule la voie ext

Question 25

quels rôles jouent les mir dans l’apoptose

Answer 25

régulateurs pro ou anti