Apoptose Flashcards
quel est le rôle de l’apoptose dans le développement
modelage do’organes, élimination de strcutures, contrôle du nombre et de la qualité des cellules, équilibre mort/prolifération
quelles différences entre apoptose et nécrose
apo : condensation du noyau, organites longtemps intacts, pas de lyse cellulaire, bourgeonnement de corps apoptotiques
nécrose : organites altérés, noyau longtemps intact,lyse cellulaire et des organites
comment caracteriser la biochimie de l’apoptose
active, energie dépendante, associée à un processus de synthèse protéique
à quels évenements moléculaires est associée l’apoptose
flip flop des proteines, alteration de la perméabilité mitochondriale, cascade d’activation enzymatique ( caspase), fragmentation entre les nucléosomes (2-300pb, pas d’inflammation
quelles techniques de labo permettent de mettre en évidence l’apoptose ?
southern blot, essai tunnel, iodure de propidium et cytométrie en flux, annexine V, mesure de l’activité des caspases
comment fonctionne l’essai tunnel
l’adn se fragmentant dans l’apoptose, on fixe du dUTP sur les extrémités 3’OH ainsi crées qu’on met en évidence par un précipité coloré
comment fonctionne la cytométrie en flux à l’IP
on perméabilise les cellules, l’IP s’intercale dans les coupures, cela permet de quantifier l’adn par cellule, si on a un pic inferieur à 2n c’est une apoptose
quelles protéines font un flip flop lors de l’apoptose
les phosphatidylsérines : elles deviennent accessibles
comment fonctinonne l’annexine V
c’est un composé Ca-dép très affin pour les PS, si on arrive à marquer les cellules avec l’annexine V couplée à un fluorochrome (comme FITC) c’est qu’il y’a apoptose
comment mesure-t-on l’activité des caspases
en inhibant les caspases actives avec FLICTA : s’il est fixé cela veut dire qu’on a des caspases actives donc une apoptose, on le détecte car il émet un signal vert
quelles sont les trois phases de l’apoptose
induction : appel à des récepteurs de signaux inducteurs (très variés) ; étape reversible
phase de régulation : initiation : activation des caspases 8-9
effection : intégration des signaux par activation des caspases 3-6-7, efflux de Ca ; irreversible
destruction : flip flop des PS, irreversible
décrivez les caractéristques des deux voies de l’apoptse
intrinsèque : en réponse à un stimulus, perméabilisation de la mitochondrie, libération de Cyt C / Diablo, activation des caspases
extrinsèque : ligand (ex : Fas-L) se fixe à un TNFR, active une voie impliquant FADD qui active les caspases (3-8)
quels sont les différents acteurs moléculaires de l’apoptose
TNFR, caspases, Bcl-2 (inhib casp), protéine cytosolique et mitochondriale, p53
caractérisez les caspases
cystéines protéases clivant après aspartate, d’abord connue pour l’activation de l’interleukine 1𝛃, activées par protéolyse, s’auto amplifient. on a 14 caspases pour >40 substrats
quelles sont les deux grandes familles de caspases
initiatrices (2, 8, 9, 10) : auto activation
effectrices (3, 6, 7) : protéolyse de substrats spécifiques : rendent l’apoptose irreversible
quels sont les substrats des caspases effectrices
proteines structurales, de signalisation, du métabolisme ARN/ADN, facteurs nucléaires et proteines du cycle cellulaire
qu’est-ce que Ced4 et ses homologues tels que Apaf-1
protéines activatrices des caspases
caractérisez la famille Bcl-2
elles sont transmembranaires avec un double rôle :
pro-apoptotique : Bax, Bad, Bid, Bik
anti-apoptotiques : Bcl-2
elles contrôlent l’ouverture des pores de la mitochondrie, servent d’ancrage aux régulateurs de l’apoptose
si l’une des deux famille est en excès par rapport à l’autre elle exerce son activité
quelle est la nature de l’interaction entre la mitochondrie les caspases cyt C bcl-2 Bax VDAC p53
lors de l’apoptose, Bcl-2 est inhibé : on a liberation de cyt c menant à l’activation de caspase 9 et à la formation de l’apoptosome (7x Apaf-1, Cyt C, casp 9) qui active casp 3 ; Bax interagit avec VDAC pour créer le megacanal (p53 régule Bax à la hausse)
caractérisez le couple Fas et Fas-L
Fas-L est une glycoprotéine de surface à expression restreinte, présente dans NK, LT activés
Fas est un recepter exprimé dans de nombreux tissus
voie extrinsèque
en contexte apoptotique ui exprime TNF 𝛂
macrophages en réponse à un processus infectieux : voie extrinseque
après activation de fas comment agit la voie TRAILR
le death domain (DD) du recepteur se fixe à FADD = complexe DISC qui va activer casp 8 qui va activer casp 3
voie extrinsèque
quelles sont les caspases inductrices des differentes voie ? et effectrices
ext : 8 : int : 9
effectrice : 3
comment les deux voies interagissent
Bid de la voie ext regule la voie int
IAP de la voie int regule la voie ext
quels rôles jouent les mir dans l’apoptose
régulateurs pro ou anti
