Adénovirus Flashcards
Structure et applications biotechnologiques
Vrai ou faux : les adénovirus (Ads) provoquent uniquement des maladies bénignes
Faux, à l’exception des cas chez les patients immunodéficients
Quelle est la structure d’un adénovirus ?
Virus non enveloppé à ADN double brin
Comment est composée la capside ?
Icosaédrique (20 facettes et 12 sommets), sur chaque sommet la base du penton interagit par liaison non covalente avec une fibre (tête + tige + queue)
Combien y a t-il de capsomères ?
252 : 240 hexons qui constituent les 20 facettes et 12 pentons par virus (1 par sommet)
Combien existe t-il de sous-groupe d’adénovirus ?
7 (A-F) divisés en 60 sérotypes
Vrai ou faux : les Ads sont le vecteur le plus utilisé en thérapie génique
Vrai
Par quelle méthode peut-on déterminer la structure des Ads ?
Cryomicroscopie (+ simple que la cristallographie)
Quels sont les 3 capsomères structuraux majeurs ?
L’hexon, la base du penton et la fibre
Comment est structuré l’hexon ?
Homotrimère (capsomère trimérique de 3 monomères identiques) de 315 kDa (3x105)
Quelle est la protéine la plus immunogène sur un adénovirus ?
Hexon
Comment est structuré le penton ?
Homopentamère (capsomère pentamérique de 5 monomères identiques) de 300 kDa (5x60)
Comment est déclenchée l’internalisation du virus ?
La boucle RGD du penton déclenche l’internalisation du virus entier par interaction avec l’intégrine (=récepteur secondaire)
Comment est structuré la fibre ?
Homotrimère (capsomère trimérique de 3 monomères identiques) de 105 kDa (3x35) pour l’Ad3
Vrai ou faux : la tête de la fibre réagit avec les récepteurs primaires lors du cycle viral
Vrai
Comment est composé le génome ?
- ADN db
- 2 séquences inversées répétées (ITR = Inversed Terminal Repeat) qui déclenchent la circularisation de l’ADN
- Séquence ATAATA sur l’extrémité 5’ = origine de réplication
Quels sont les 3 types de cycles viraux ?
- Cycle lytique : production d’une nouvelle particule virale et lyse de la cellule
- Cycle abortif : le virus rentre dans une cellule sans produire de particule
- Cycle de transformation : début des tumeurs cancéreuses (intégrines déclenchent l’internalisation)
Qu’est ce qu’une cellule permissive ?
Cellule infectée dans laquelle le virus se multiplie
Quel est le cycle viral ?
- Phase précoce : reconnaissance, fixation et internalisation du virus
- Phase de réplication de l’ADN viral et de production des protéines virales
- Phase tardive : assemblage et libération des virions
Vrai ou faux : le virus peut se camoufler du système immunitaire lors de la phase précoce
Vrai
En quoi peuvent s’auto-assembler certains sérotypes (Ad3) durant la réplication virale ?
Penton dodécaèdre (PtDd)
Quels sont les 3 vecteurs les plus utilisés en thérapie génique ?
- Adénovirus
- Rétrovirus
- Plasmide d’ADN
Quel est le but de la thérapie génique ?
Apporter un gène d’intérêt grâce à un génome viral et bloquer la réplication virale afin de lyser les cellules
Comment utiliser les Ads dans la thérapie génique ?
Modifier le génome des Ads sans qu’il perde ses capacités de fabriquer des virus et qu’il produise la protéine d’intérêt
Quel est le problème de l’utilisation des Ads pour la thérapie génique ?
La cassette E1 déclenche l’expression de tous les gènes qui contrôlent la réplication virale –> une amplification du virus est nécessaire avant injection
Qu’est ce que l’ADDomer (ADD) ?
PtDd conçu pour exprimer tout type d’épitopes linéaires
Quel système est utilisé dans les cellules d’insectes ?
Baculovirus préparé dans des cellules SF21
Vrai ou faux : les capacités d’internalisation sont conservées malgré le clivage
Vrai
Combien peut-on insérer d’AA dans la boucle RGD entre Sacl et Xbal ?
200
Comment insérer des épitopes repliés dans la boucle RGD ?
Essayer d’agrafer l’extrémité N-ter des fibres avec des liaisons disulfures sur l’ADD
Que permet un peptide agrafé à l’ADD par les
ponts disulfures ?
Ouverture de la voie à l’extension du peptide avec des protéines plissées
Combien d’épitopes peuvent être insérés dans des ADD ?
60 ou 120 repliés ou relâchés
