5-manipulation de l'ADN

Question 1

v ou f : l’ADN est un polymère

Answer 1

Vrai

Question 2

En fonction de quoi varie la taille de l’ADN?

Answer 2

du nombre de nuclotide

Question 3

Décrivez la charge de l’ADN

Answer 3

forte charge négative (chargé et peu de groupement hydrophobe)

Question 4

Comment (conditions) varie la solubilité de l’ADN en solution?

Answer 4

selon les conditions saline et presence de substance organique dans l’eau

Question 5

Comment est-ce qu’on précipite généralement l’ADN?

Answer 5

avec de l’éthanol (isopropanol)

Question 6

Donne deux raisons pour lesquelles on précipiterait l’ADN?

Answer 6

pour le concentrer ou changer son tampon

Question 7

Donne un protocole typique de précipitation d’ADN (ethanol)

Answer 7

-l’ajout de 2.5 volumes d’éthanol et 0.25M d’acétate de sodium
à une solution contenant de l’ADN
- la solution est ensuite mise à -20°C pendant au moins 30 minutes
et l’ADN est récupéré par centrifugation à 10,000 rpm pendant 10
minutes à 4°C dans une microcentrifugeuse
- une certaine quantité de sels sera aussi précipité avec l’ADN. Des lavages
subséquents avec de 70% l’éthanol permettra de les enlever

Question 8

Expliquez la méthode de partition de phase (extraction de l’ADN)

Answer 8

les acides nucléiques sont retrouvés
dans la phase aqueuse et les protéines, pour la plupart dénaturées, partitionnent(se séparent)
dans le phénol, la phase plus dense, et à l’interface des deux phases

Question 9

sur quel phénomène se base le principe de partition de phase (extraction de l’ADN)

Answer 9

polarité des solvants (eau et phenol)

Question 10

Donnez le protocole typique de précipitaton (extraction au phenol)

Answer 10

-Agiter doucement 1 vol du phénol neutralisé avec 1 vol de la solution contenant de l’ADN et extraire 2 fois
-éliminér les traces résiduelles de phénol par extraction avec du chloroforme immédiatement après
-(le pH du phénol doit d’abord être ajusté à un pH autour de 8 - l’ADN est partiellement soluble dans le phénol acide)

Question 11

À quoi servent les protéases dans l’extraction au phenol?

Answer 11

servent a dégrader les protéine pour faciliter leur extraction du phenol

Question 12

Lors de l’utilisation de la méthode de partition de phase, à quoi sert le chloroforme et comment est-il éliminé ?

Answer 12

il sert à enlever les trace de phénol et il est éliminé par précipitation avec l’éthanol

Question 13

Définir la température d’hybridation des amorces

Answer 13

température qui détermine la stabilité de l’hybride une fois l’appariement amorse/matrice fait

Question 14

De quoi dépend la température d’hybridation des amorces (PCR)?

Answer 14

-longueur des amorces (+ c’est long, + T élevé)
-Composition en nucléotides (+ ya des C/G, +T est élevé)

Question 15

Donne la température de polymérisation optimale de la Taq polymérase

Answer 15

72 degrés

Question 16

V ou F : tous les ADN polymérase sont identiques

Answer 16

Faux

Question 17

V ou F : on ne peut pas utiliser l’électrophorèse sur gel pour les acides nucléiques

Answer 17

Faux, ce sont des molécules chargées

Question 18

Quel est le gel utilisé pour l’électrophorèse des acides nucléiques et pourquoi?

Answer 18

le gel d’agarose, les acides nucléiques pénètre difficilement le polyacrylamide (marche juste avec petit acides nucléiques- peu de nucléotides-quelques centaines)

Question 19

De quoi dépend la séparation de l’ADN dans un méthode d’électrophorèse?

Answer 19

de la masse moléculaire de l’ADN, donc aussi de la taille des fragments d’ADN

Question 20

Par quoi et comment sont coloré les bande d’ADN dans la méthode d’électrophorèse?

Answer 20

par bromure d’éthidium (molécule aromatique) qui s’intercale entre les base

Question 21

V ou F : il est possible d’utiliser les même techniques de chromatographie utilisé pour purifier les protéines pour la purification des acides nucléiques

Answer 21

Vrai

Question 22

Quelle est la particularité de la chromatographie par échange d’ions pour l’ADN/ARN?

Answer 22

on doit utiliser un échangeur anionique pcq A.N = charge négative

Question 23

Dans quel cas la filtration dur gel des acides nucléiques est-elle utilisé?

Answer 23

surtout utilisée pour déssaler des oligonucléotides

Question 24

À quoi sert la chromatographie d’affinité pour les acides nucléiques?

Answer 24

utilisé pour purifier les ARNm des cellules eucaryotes

Question 25

Donne une methode de purification et séparation de l’ADN

Answer 25

l’ultracentrifugation sur gradient de chlorure de césium

Question 26

De quoi depend la densité de flotaison de l’ADN dans un gradient lors d’un ultracentrifugation?

Answer 26

Dépend de sa composition en base (peut séparer l’ADN nucéaire et mitochondriale)