4-Ultra-centrifugation Flashcards
Quelle condition de densité (liquide et molécule) est nécessaire pour permettre la sédimentation?
d (densité molécule) > do (densité liquide)
En quoi consiste la centrifugation?
Exposer les échantillons à de forte accélération (Force) pour permettre la séparation des constituants–>culot et surnageant
Nommer les 3 type des centrifugeuse.
-centrifugeuse de table –>tube Eppendorf 1,5ml
-Centrifugeuse haute vitesse –>jusqu’à 40 000g pour volume jusqu’à 50/100ml
-ultracentrifugeuse –> jusqu’à 100 000 g
V ou F : les macromolécules en solution soumises à la force gravitationnelle montre des évidence de sédimentation
Faux, il faut qu’elles subissent une accélérations énorme
Nomme une façon de garder dispersées de façon homogène les macromolécules en solution.
par agitation thermique
De quoi dépend la vitesse avec laquelle une particule sédimente dans une ultracentrifugeuse?
de sa masse
Décrit la relation de la force de sédimentation
F sédimentation = F centrifuge - F flottaison(due au déplacement de la solution)
Quelle sont les deux éléments concerné dans la force de friction?
la particule et la solution
Décrit la phase stationnaire lors d’une centrifugation.
moment après l’accélération où toutes les forces sont contrebalancé
Donnez une autre utilité la technique de sédimentation.
à mesurer la masse des macromolécules
Qu’est ce que le volume partiel spécifique et qu’est ce qu’il permet de calculer?
c’est le changement en volume lorsque 1g sec de particules est dissous dans une solution à
volume infini et ça sert à calculer le volume d’une particule
Comment est exprimé la valeur du coefficient de sédimentation?
sa valeur est exprimée en unités de 10E-13 sec qui sont connues sous forme de Svedbergs (S)
À quoi peut-on comparer le coefficient de sédimentation?
coefficient de mobilité électrophorètique
V ou F : on peut obtenir la masse à partir du coefficient de sédimentation et de friction
Faux
V ou F : l’analyse des complexes de macromolécules utilise TOUJOURS l’ultracentrifugation
Vrai
Sous quelle unité est souvent exprimé la masse des constituants des complexes?
Svedberg (S)
De quoi dépend la centrifugation différentielle ?
de la taille des particules
Pour quoi est-ce que la centrifugation différentielle est généralement utilisé?
-Récupération de culot
-Obtention de préparation partiellement pures d’organelle sub-cellulaire et macromolécule
Pour quoi les centrifugeuses préparatives sont-elles conçu?
Pour les échantillons à grand volume
Qu’est-ce qui arrive à la [C] et densité d’une solution inerte lors d’une sédimentation?
Elle varie du haut vers le bas du rotor (augmente le pouvoir de la résolution de la centrifugeuse)
Donnez les deux application de la centrifugation préparative
-Ultracentrifugation en zones
-Ultracentrifugation en gradient de densité à l’équilibre
l’ultracentrifugation en zone sépare les particule selon quel paramètre…
leur coefficients de sédimentation
Expliquez le montage d’une ultracentrifugation en zone
solution de macromolécules est déposée sous forme de couche en haut d’un gradient de densité préparé au préalable
Quel composé est utilisé pour former le gradient utilisé en ultracentrifugation de zone?
le saccharose
Comment l’ultracentrifugation de zone sépare les macromolécules
Celles de forme similaire selon leur masse
Comment est récolté les parties séparé d’une centrifugation en zone
avec une aiguille en bas du tube qui récupère les différentes zones
L’ultracentrifugation par densité d’équilibre sépare les macromolécules selon…
leur densité
Dans l’ultracentrifugation par densité d’équilibre, jusqu’a quand les particule sont entrainé vers le fond
Jusqu’au point où la densité de la
solution environnante est identique à celle de la particule (temps aucun impact après)–>point isopycnique
Dans quoi est dissout l’échantillon dans une ultracentrifugation par densité d’équilibre?
Dans une substance dense qui diffuse relativement vite (ex:CsCl et Cs2SO4)
Quelle doit être la densité de la particule comparé au gradient dans L’ultracentrifugation par densité
d’équilibre?
doit se trouver dans les limites des densités de gradient.
Quelle sont les différent type de rotor?
-godet oscillants (swing out)
-à angle fixe
-verticaux
L’ultracentrifugation par densité
d’équilibre est idéale (préféré) pour quoi?
séparer des macromolécules qui possèdent une gamme de densités (ex : acides nucléiques, ribosome, virus, organites subcellulaires)
À quoi sert le vacuum fait dans les ultracentrifugeuse?
Enlever la friction avec l’air pour aller vite et ne pas faire chauffer les échantillons
V ou F : On ne peut pas réfrigérer les ultracentrifugeuse?
Faux
Quels deux points sont important de s’assurer lors de l’utilisation d’une ultracentrifugeuse?
-utiliser le bon rotor
-bien balancer le rotor
Quelles sont les deux manière d’exprimer la force centrifuge appliqué sur un échantillon?
RPM et RCF
