שיעור 5 Flashcards

PCR

1
Q

מה צריך לשים במבחנה בשביל שיהיה שכפול
DNA

A
  1. DNA Polymerase
  2. Buffer containing ATP and Mg
  3. dNTPs
  4. DNA template
  5. Primers x2 (one forward one backward)
  6. Aqueous solution
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
1
Q

Annealing

A

החיבור בין הפריימר לדנא

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
2
Q

Tm

A

הטמפרטורה בה הפריימרים נקשרים לדנא
בה מתרחש ה
annealing

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
3
Q

What is the process of in vitro DNA replication

A

Heating to 95C - dentauration of dna to two strands
Reducing temp gradually to recieve Annealing
Polymerization in 37C

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
4
Q

How many molecules of DNA do we get after 1 cycle?

A

2

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
5
Q

How many DNA molecules do we get after 2 cycles?

A

4

וזה פעם ראשונה שנקבל מולוקולה חד גדילית שמכילה רק את ה
region of interest
אבל לא כולן ככה

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
6
Q

How many DNA molecules do we get after 3 cycles?

A

8
פעם ראשונה שנקבל מולוקולה דו גדילית כפי שהיא רצויה

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
7
Q

PCRאיזה פרמטרים ב
נשנה בהתאם לצרכים שלנו

A

annealing temp
משך הזמן
כמות הסייקלים

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
8
Q

אילו אופטימיזציות אפשר לעשות כדי שהריאקציה תעבוד טוב יותר

A

ריכוז פריימרים
ריכוזי טמפלטים
טמפרטורה
מספר הסייקלים

אבל צריך להיזהר מיותר מידי טמפלטים
יכול לקרות קשירה לא סצפיפית
יותר מידי סייקלים גם נקבל חוסר דיוק

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
9
Q

ביקורות שחשוב לכול ב
pcr

A

ביקורת שלילית -
במקום טמפלייט לשים רק מים
חשוב על מנת לוודא שהמים נקיים

ביקורת חיובית-
פלסמיד שאחחנו יודעים שמכיל מקטע הזה

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly