שיעור 5 Flashcards
PCR
מה צריך לשים במבחנה בשביל שיהיה שכפול
DNA
- DNA Polymerase
- Buffer containing ATP and Mg
- dNTPs
- DNA template
- Primers x2 (one forward one backward)
- Aqueous solution
Annealing
החיבור בין הפריימר לדנא
Tm
הטמפרטורה בה הפריימרים נקשרים לדנא
בה מתרחש ה
annealing
What is the process of in vitro DNA replication
Heating to 95C - dentauration of dna to two strands
Reducing temp gradually to recieve Annealing
Polymerization in 37C
How many molecules of DNA do we get after 1 cycle?
2
How many DNA molecules do we get after 2 cycles?
4
וזה פעם ראשונה שנקבל מולוקולה חד גדילית שמכילה רק את ה
region of interest
אבל לא כולן ככה
How many DNA molecules do we get after 3 cycles?
8
פעם ראשונה שנקבל מולוקולה דו גדילית כפי שהיא רצויה
PCRאיזה פרמטרים ב
נשנה בהתאם לצרכים שלנו
annealing temp
משך הזמן
כמות הסייקלים
אילו אופטימיזציות אפשר לעשות כדי שהריאקציה תעבוד טוב יותר
ריכוז פריימרים
ריכוזי טמפלטים
טמפרטורה
מספר הסייקלים
אבל צריך להיזהר מיותר מידי טמפלטים
יכול לקרות קשירה לא סצפיפית
יותר מידי סייקלים גם נקבל חוסר דיוק
ביקורות שחשוב לכול ב
pcr
ביקורת שלילית -
במקום טמפלייט לשים רק מים
חשוב על מנת לוודא שהמים נקיים
ביקורת חיובית-
פלסמיד שאחחנו יודעים שמכיל מקטע הזה
