3.3 Trabajar con proteínas

Question 1

¿Cómo logra separar proteínas el procedimiento de diálisis?¿Cuál es el fundamento de la técnica?

Answer 1

La diálisis es un procedimiento que SEPARA las proteínas de los disolventes apro­vechando el mayor tamaño de las proteínas. El extracto parcial­mente purificado se coloca en un saco o tubo de membrana semipermeable. Cuando éste se suspende en un volumen mucho mayor de disolución tamponada de fuerza iónica apropiada, la membrana permite el intercambio de sal y tampón, pero no de proteínas. De esta forma, la diálisis retiene las proteínas
grandes dentro del saco o tubo de membrana, mientras que permite que la concentración de los demás en la prepara­ción de proteína cambie hasta llegar al equilibrio con la solución del exterior de la membrana. La diálisis puede utilizarse, por ejemplo, para eliminar el sulfato amónico de una preparación de proteína.

Question 2

¿Qué otro procedimiento se puede utilizar para la separación de proteínas?

Answer 2

Otro procedimiento que se utiliza para la separación de proteínas es la cromatografía en columna que utiliza como fundamento las:
1. Diferencias de carga
2. Tamaño
3. Afinidad de unión

Question 3

Dentro de la cromatografía en columna, las proteínas pueden ser separadas en base a diferentes fundamentos, lo cual define la cromatografía, mencione cuales son.

Answer 3

1. Cromatografía de intercambio iónico, utiliza la diferencia de carga eléctrica de las proteínas a un pH determinado.
   Y en base a qué grupo cargado está formada la matriz es la clasificación de la cromatografía.
   Si utiliza grupos aniónicos se denominada cromatografía de intercambio CATIÓNICO.
   Si utiliza grupos catiónicos se denominada cromatografía de intercambio ANIÓNICO.

Question 4

Un bioquímico quiere separar dos péptidos mediante cromato­grafía de intercambio iónico. Al pH de la fase móvil que se va a utilizar en la columna un péptido (A) tiene una carga neta de -3 debido a la presencia de más residuos Glu y Asp que residuos Arg, Lys e His. El péptido B tiene una carga neta de +1 ¿Qué péptido eluirá antes de una resina de intercambio catiónico? ¿Cuál de ellos eluiría primero de una resina de intercambio aniónico?

Answer 4

La resina de intercambio catiónico tiene cargas negativas y se une a moléculas cargadas positivamente, retardan­ do su paso a través de la columna. El péptido B, con su carga neta positiva, interaccionará más fuertemente con la resina de intercambio catiónico que el péptido A, por lo que este último eluirá antes. El péptido B eluirá antes en la resina de intercam­bio aniónico. En este caso, el péptido A, de carga negativa, se encontrará retardado a causa de su interacción con la resina cargada positivamente.

Question 5

Mencione técnicas que permiten la separación de proteínas

Answer 5

1. Diálisis
2. Cromatografía de intercambio catiónico
3. Cromatografía de intercambio aniónico
4. Cromatografía de exclusión molecular
5. Cromatografía de afinidad
6. HPLC o de alta resolución
7. Electroforesis

Question 6

¿Para qué sirve el tampón en una electroforesis?