26 février

Question 1

Comment cribler génétiquement pour étudier un phénomène biologique?

Answer 1

1- identifier un phénomène
2- obtenir un ensemble de mutants de phénotypes semblales et incapables d’effectuer le processus en question
3- faire des tests de complémentation pour dét. le nbre min. de gènes impliqués
4- identifier le prod. prot. de chaque gène essentiel et déterminer son role

Question 2

quelles sont les deux facons d’isoler un gène?

Answer 2

1- partir de la protéine pour remonter au gène (stratégie historique 1980-90)
2- partir de la position du gène sur la carte génétique (clonage positionnel 1990-2000)

Question 3

comment encapsider in vitro de l’ADNc?

Answer 3

Les protéines virales qui se chargent normalement d’encapsider l’ADN in vivo vont encapsider l’ADNc in vitro

Question 4

qu’est ce que le criblage?

Answer 4

C’est le processus qui essaie d’identifier dans un ensemble (banque) de clones celui ou ceux qui contiennent la séquence d’intérêt à l’aide d’une sonde spécifique

Question 5

quelles sont les étapes du séquencage “Sanger” automatisé?

Answer 5

• fragmentation
• clonage dans un vecteur plasmidique
• séquencage cyclique
• séparation pas électrophorèse en capillaires
• lecture a l’aide d’étiquettes fluorescentes

Question 6

quelles sont les étapes de deuxième génération?

Answer 6

• fragmentation de l’ADN
• ligation d’adapteurs aux extrémités des fragments
• obtention d’une matrice de polonies
• extension enzymatique avec nucléotides marqués aux colorants fluorescent
• lecture cyclique par imagerie de la matrice