2022 Reeksamen Flashcards
Forklar kort hvad et mutagen er, giv et eksempel på et mutagen og giv tre eksempler på typer af ændringer på DNA’et forårsaget af mutagener.
Mutagener er typiske kemiske stoffer (samt UV) som ændrer baser i DNA’et efter replikationen. Ændringer på DNA’et kunne være oxidation, deamination, alkylering og krydslinking.
Visse celler såsom neuroner skal transportere mitokondrier fra den ene side af cellen til den anden. Forklar hvorfor? Angiv hvilket cytoskelet bruges til transport af mitokondrier i cellerne? Vesikler bruges også til at transportere molekyler fra et organel til et anden i endomembransystemet. Angiv tre organeller involveret i endomembransystemet.
Det gør den for at genere ATP og det gør den et sted i cellen der har brug for ATP (for eksempel actin polymerisation). Hvilke cytoskelet? Mikrotubulus og motorproteiner.
ER, Golgi apparter og lysosomer.
For at undersøge det mitokondrielle arvemateriale nærmere, beslutter vi os for at isolere DNA’et fra mitokondrierne og analysere dette. Angiv hvilken teknik vi kan benytte til at finde mutationen i DNA’et? En anden ”kvalitetskontrol” kunne være at man fragmenterede DNA’et, og dernæst undersøgte det på en gel. Hvorledes kan man lave fragmenter af DNA, og hvilken type gel man kan benytte til at undersøge DNA fragmenter?
Den mest oplagte teknik til at finde mutationen ville være en sekventering af DNA’et. Man kan fragmentere DNA’et ved hjælp af restriktionsenzymer, og dernæst undersøge dem ved hjælp af en agarose gel.
Vores studier af det mitokondrielle DNA viser at enzymet Cytochrome C Oxidase er blevet muteret, og at der er tale om en enkelt ændret aminosyre som befinder sig i det aktive site. Vi ønsker at studere det muterede enzym ved hjælp af et funktionelt assay. Vi oprenser derfor mitokondrier og udfører et assay, som følger oxidation af Cytochrome C. Dette assay resulterer i dannelse af en farve, som vi kan måle ved spektrofotometri. Nedenstående data viser aktiviteten af det normale og det muterede enzym ved to forskellige pH værdier. Beregn KM og Vmax og giv et bud på hvilken type aminosyre ændring der kunne være tale om.
Ved pH 7 ses at det muterede enzym ikke er i stand til at udnytte den ”høje” pH 7 til at forbedre aktiviteten (Vmax). Dette kunne tyde på at der var tale om en mutation af en aminosyre som kan protoneres/deprotoneres, som mister sin ladning eller bliver ladet omkring denne pH
