2- Observations microscopiques Flashcards
Quel type de source lumineuse est utilisée dans le microscope confocal à balayage laser?
Un laser UV
Comment appelle-t-on les colorants en microscopie à fluorescence?
Des fluorochromes
À quoi sert le cône de Abbe dans la microscopie à fond noir?
À s’assurer que seule la lumière réfléchie ou réfractée par l’échantillon forme une image
Quels 3 microscopes peuvent être intégrés dans le même instrument?
- À fond clair
- À fond noir
- À contraste de phase
Quelle est la différence principale entre le microscope à effet tunnel et à force atomique?
Le microscope à force atomique permet d’étudier des surfaces qui ne conduisent pas bien l’électricité
Quelles sont les coloration différentielles les plus fréquentes?
- Coloration de Gram
- Coloration alcoolo-acido-résistance
La longueur d’onde de la lumière émise par l’échantillon suite à l’excitation sera-t-elle plus grande ou plus petite que celle de la lumière excitatrice?
Plus grande (donc de plus faible énergie)
Les cellules sont-elles vivantes ou mortes en microscopie à contraste d’interférence différentielle?
Vivantes, car ni fixation ni coloration
À quel facteur est directement proportionnel le contraste?
À la différence de quantité de lumière absorbée par l’échantillon et l’environnement (plus l’échantillon absorbe, plus le contraste est bon)
Qu’est-ce que la coloration simple?
Un seul colorant chargé positivement se fixera sur les organismes chargés négativement, il y aura coloration uniforme
Quelles structures cellulaires sont souvent mises en évidence par les colorations différentielles?
- Endospores
- Capsules
- Flagelles
- Corps d’inclusion
En microscopie à fond clair, quel est le meilleur moyen d’augmenter le contraste?
L’utilisation de coloration
Quels sont les 2 types de microscopes à balayage de sonde?
- À effet tunnel
- À force atomique
Sur quel principe est basé la coloration de Gram?
Rétention du violet de cristal
Quel colorant est souvent utilisé en coloration simple?
Bleu de méthylène
Pourquoi la coloration alcoolo-acido-résistance est-elle surtout utilisée pour mettre en évidence les mycobactéries?
Car les mycobactéries ont des parois cellulaires qui possèdent de l’acide mycolique qui retient le carbol funchsine
Quel est le principe du microscope à force atomique?
Déplacement d’une sonde effilée à la surface de l’échantillon tout en maintenant constante la distance entre la pointe de la sonde et cette surface
Que devrait-on faire avec la longueur d’onde afin de diminuer la limite de résolution?
Nous devrions la diminuer
Quels sont les 3 inconvénients d’utiliser les UV (faible longueur d’onde) comme source lumineuse?
- Le verre est opaque aux UV, on devrait donc utiliser du quartz ce qui est très couteux
- Comme le UV est à l’extérieur du visible, on devrait faire une transformation optique pour le rendre visible
- Ça pose des problèmes de sécurité car les UV sont dommageables pour l’oeil
Quel est l’effet de la préparation à l’état frais sur le contraste?
Diminution du contraste
Dans un microscope intégré, quelle pièce est mobile?
Le condensateur
Que doit on faire face à la limite suivante: Les électrons voyagent dans le vide?
L’intérieur du microscope doit être sous vide
Pourquoi la coloration n’est pas possible pour observer la motilité en microscopie à fond clair?
Car il existe peu de colorants vitaux, donc les organismes sont souvent morts après la coloration
L’image en microscopie à contraste de phase est-elle sombre ou claire?
Image sombre sur fond clair
Quel est le principe de l’immuno-localisation cellulaire?
On couple des anticorps et des billes (Fe ou Au), on observe l’accumulation de billes à l’endroit où l’anticorps a reconnu la protéine
Qu’est-ce que la cryotomographie électronique?
Technique qui permet de faire des strates de l’échantillon sans production de coupe, fait dans la glace vitreuse.
Que doit on faire face à la limite suivante: Les électrons sont non-pénétrants?
On doit utiliser des coupes ultra-fines
Sur quoi peut être récolté l’image en microscopie électronique?
- Écran fluorescent
- Plaque photographique
- Détecteur numérique
Quels sont les 3 facteurs sur lesquels on peut intervenir en
- Longueur d’onde
- Indice de réfraction du milieu
- Angle du cône de lumière
Que doit on faire face à la limite suivante: Le matériel vivant est non électron-dense?
On doit colorer par des matériaux imperméables aux électrons (métaux, acide phosphotungstique)
Sur quel principe est basé la microscopie à contraste de phase?
En ayant des structures de densités différentes, il y a des réfractions différentes et donc des intensités lumineuses différentes
Quels sont les 2 grands types de microscopes?
- Photonique
- Électronique
En quoi consiste la technique de l’ombrage?
On vaporise des métaux qui absorbent des électrons, et il y a une ombre dans les portions où il n’y a pas accumulation de métaux
Que permet d’observer la coloration négative?
- Relief
- Structure des virus
Quels facteurs forment l’agrandissement?
Objectif x oculaire
Vrai ou faux. Le contraste sera élevé lorsque l’échantillon est placé dans beaucoup d’eau.
Faux, il sera faible car l’eau absorbe une grande quantité de lumière
L’augmentation du contraste en microscopie à contraste de phase altère-t-elle l’organisme observé?
Non, car on joue seulement avec l’intensité de la lumière et il n’y a ni coloration ni fixation
Quelle est la principale limite du microscope à contraste d’interférence différentielle?
Les préparations doivent être transparentes, car on doit pouvoir modifier la polarisation de la lumière
Quelle est la limite de résolution du microscope électronique?
0,05 nm
À quel microscope ressemble le microscope à contraste de phase (vu de l’extérieur)?
Microscope à fond clair
Quel agrandissement peut-on atteindre avec un microscope à effet tunnel?
Jusqu’à 10*8 (100 millions)
Quelle est la meilleure limite de résolution du meilleur microscope photonique?
0,1 micron (u) ou 100 nm
Qu’est-ce que la limite de résolution?
Distance minimale entre 2 points qui peuvent être perçus comme étant distincts
Quel est le principe du microscope électronique à transmission?
Les électrons traversent l’échantillon (détecteur sous l’échantillon)
Quel est le principe du microscope électronique à balayage?
Balayage de la surface de l’échantillon (détecteur latéral)
En quoi consiste la technique de cryodécapage?
L’échantillon est congelé rapidement à -180 C. On fait ensuite une coupe transversale et l’échantillon casse aux zones de faiblesse (souvent membrane). Si on fait la technique de l’ombrage, on peut observer les structures et l’intérieur de la cellule.
Vrai ou faux. Les virus peuvent être vus autant en microscopie photonique qu’électronique.
Faux, ils sont trop petits pour être vus en microscopie optique (électronique)
Quel est le principe du microscope à balayage de sonde?
Une sonde balaie la surface et mesure le déplacement vertical/horizontal et le courant entre les nuages électroniques
À quel groupe de microscope appartient le microscope à balayage de sonde?
Ni photonique, ni électronique (classe à part)
Qu’est-ce qui explique la limite de résolution aussi basse du microscope électronique?
La longueur d’onde extrêmement petite des électrons (5 x 10-12) comparé à celle des photons (5 x 10-7)
Vrai ou faux. La microscopie à fond noir requiert une coloration et une fixation.
Faux, elle n’en requiert pas et il est donc possible d’observer des échantillons vivants
Qu’est-ce qui remplace la lumière en microscopie électronique?
Les électrons
Quelles sont 3 applications en microscopie à fluorescence?
- Fluorochromes vitaux (proportion de cellules vivantes et mortes)
- Immunofluorescence (diagnostique en détectant des pathogènes)
- FISH (quantification de proportions)
Qu’est-ce que la réfraction?
Déviation d’un rayon lumineux passant d’un milieu à un autre
Quel microscope donne une impression de pseudo-relief 3d?
Microscope à contraste d’interférence différentielle
La préparation à l’état frais est adéquate pour observer quels éléments?
- Morphologie
- Motilité
- Axe de division cellulaire (protozoaires)
- Corps d’inclusion cytoplasmique (pour microorganismes de grande taille)
Qu’est-ce que l’hybridation fluorescente in situ (FISH)?
Des sondes ADN fluorescentes sont mis dans l’échantillon. Si la sonde reconnait une séquence, il y a hybridation et fluorescence
Quel est le grossissement maximal en microscopie optique?
1000x
Qu’est-ce que la préparation à l’état frais?
Aucune intervention, on ne fait que déposer l’échantillon sur la lame et on referme la lamelle
Que devrait-on faire avec l’indice de réfraction du milieu afin de diminuer la limite de résolution?
L’augmenter
Quelle est la relation entre la puissance d’une lentille et la distance focale?
Plus la distance focale est courte, meilleur l’agrandissement sera
Quelle différence observe-t-on dans le condensateur du microscope à contraste d’interférence différentielle?
Il est composé d’un système de lentilles polarisantes contrôlées par informatique
À quoi servent les billes témoins dans la technique de l’ombrage?
Comme elles ont une taille prédéfinie, on peut comparer avec les ombres et déterminer l’élévation
Par quoi sont remplacés les condensateurs, objectifs et oculaires en microscopie électronique?
Par des électro-aimants et des lentilles magnétiques
Quelles sont les 4 techniques de préparation en microscopie électronique?
- Coloration négative
- Ombrage
- Cryodécapage
- Immuno-localisation cellulaire
Quel est le principe du microscope à contraste d’interférence différentielle?
Les milieux de réfractions différents modifient la polarisation de la lumière et produisent des intensités lumineuses différentes
Vrai ou faux. Le microscope à contraste de phase est plus récent que le microscope à fond noir.
Vrai
Quel est le grossissement maximal en microscopie électronique?
400 000x
Quel type de lumière sert de lumière excitatrice en microscopie à fluorescence?
Une lumière UV
Qu’est-ce que le contraste?
Capacité de distinguer une structure de son environnement
À quoi sert l’immuno-localisation cellulaire?
À localiser une protéine dans une cellule
Vrai ou faux. Toute la fluorescence est détectée dans le microscope confocal à balayage laser.
Faux, la seule fluorescence détectée est celle du plan au foyer
Que devrait-on faire avec l’angle du cône de lumière entrant dans l’objectif afin de diminuer la limite de résolution?
On devrait rapprocher l’angle de 90 degrés
Quelle limite est imposée sur le changement de l’angle du cône de lumière?
Une limite imposée par le fabriquant (on ne peut pas le moduler comme on veut)
Comment peut-on qualifier la limite de résolution du microscope électronique à transmission comparée à celle du microscope électronique à balayage?
À transmission = très petite
À balayage = un peu plus grande
Entre le microscope à contraste de phase et le microscope à contraste d’interférence différentielle, quel produit un halo de diffraction?
Contraste de phase
Nommer quelques applications du microscope confocal à balayage laser.
- Détection ou localisation d’une structure dans une cellule/tissu
- Développement d’un biofilm en fonction du temps
- Quantification et position de cellules vivantes et mortes
Que peut-on ajouter dans le microscope à contraste de phase pour améliorer l’image?
Des filtres colorés
Quelle étape supplémentaire est nécéssaire à la coloration en microscopie à fond clair?
Une fixation de l’organisme
Où sont situés les anneaux de phase dans le microscope à contraste de phase?
Dans le condensateur et l’objectif
Dans quels 2 domaines le microscope à force atomique peut-il servir?
- Nanotechnologies
- Biomatériaux
À quoi servent les fluorochromes vitaux et comment fonctionnent-ils?
Servent à distinguer les cellules vivantes des cellules mortes. Il y a énumération différentielle par un logiciel d’analyse d’image
Quel type de microscope permet de faire des observations en milieu aqueux?
Microscope à balayage de sonde
Quelle substance peut être ajoutée sur la lame de verre pour augmenter l’indice de réfraction du milieu?
De l’huile à immersion
En quel matériel doit être fait l’objectif du microscope à fluorescence et pourquoi?
En quartz, pour pouvoir laisser passer les rayons UV
Qu’est-ce que l’ouverture numérique?
n sin(angle)
Le microscope confocal à balayage laser fait partie de quel type de groupe de microscopes?
Photonique
De quoi est composé le microscope à fond clair et quel est le rôle de chaque partie?
- Condensateur: concentre les faisceaux lumineux vers la lame
- Objectif: 1er agrandissement
- Oculaire: 2e agrandissement
En quoi consiste la coloration négative?
On vaporise de l’acide phosphotungstique qui ne pénètre pas dans l’échantillon et est électron-dense. Les creux sont donc sombres et les protubérances claires.
Quels sont les 2 types de microscopes électroniques?
- Microscope à transmission
- Microscope à balayage
Qu’est-ce que la cryo-électromicroscopie?
Technique de congélation rapide par éthane et azote liquide, entraîne une vitrification de l’eau et l’intégrité des structures est conservée sous vide
À quel microscope ressemble le microscope à fond noir (vu de l’extérieur)?
Microscope à fond clair
Selon quels plans le laser du microscope confocal à balayage laser peut-il être balayé?
- Horizontal
- Vertical
- Temporel
Quelles sont limites du microscope électronique (3)?
- Les électrons voyagent dans le vide
- Les électrons sont non-pénétrants
- Le matériel vivant est non électron-dense
Quel est ce type de microscope ?
Microscope à fond clair
Quel est ce type de coloration ?
Coloration au cristal violet
Quel est ce type de coloration ?
Coloration au bleu de méthylène
Quel type de microscope permet l’obtention de ce genre d’images ?
Microscope à fond noir
Quel type de microscope permet l’obtention de ce genre d’image ?
Microscope à contraste d’interférence différentielle
Quel est ce type de microscope? Expliquez son contenu
Microscope électronique à transmission moderne.
Le canon à électron est au sommet de la colonne centrale et les lentilles magnétiques sont à l’intérieur de la colonne. L’image sur l’écran fluorescent peut-être vue au travers d’une loupe positionnée devant le hublot d’observation. La caméra est dans un compartiment sous l’écran.
La coloration sur l’image est-elle négative ou positive?
Négative
Que voyons nous sur la photo?
Exemple de cryodécapage
Avec quel type de microscope pouvons-nous prendre ce genre de photo?
Microscope électronique à transmission
Avec quel type de microscope pouvons-nous prendre ce genre de photo?
Cryptomographie électronique
Quel type de microscopie est-ce ?
Microscopie à effet tunnel
Quelle forme ont ces cellules bactériennes ?
Ce sont des chaînes de coques
Quelle forme ont ces cellules bactériennes ?
Ce sont des agrégats de coques
Quelle forme ont ces cellules bactériennes ?
Ce sont des chaînes de bâtonnets
Quelle forme a cette cellule bactérienne ?
Spirochlète
Quelle forme a cette cellule bactérienne ?
Forme spiralée
Quelle forme ont ces cellules bactériennes ?
Virgules
Quelle forme ont ces cellules bactériennes ?
Bactéries pédonculées
Quelle forme a cette cellule bactérienne ?
Bactérie filamenteuse
Expliquez l’effet de la pénicilinne sur la paroi cellulaire
Altère et diminue la rigidité de la paroi cellulaire ce qui fait entrer l’eau dans la cellule. L’organisme augmente de volume jusqu’à ce qu’il éclate
Que voyons nous sur la photo?
ultrastructure du flagelle bactérien
Que voyons nous sur la photo?
Flagellation monotriche
Que voyons nous sur la photo?
Flagellation lophotriche
Que voyons nous sur la photo?
Flagellation pétriche
Que voyons nous sur la photo? (2 choses)
- Flagelles (longs)
- Fimbriae (courts)
Que voyons nous sur la photo?
Pilus
Quel type de coloration voyons nous sur la photo?
Coloration négative de capsules bactérienne au microscope optique à fond clair
Avec quel type de microscope pouvons-nous prendre ce genre de photo ?
Microscope électronique
Identifiez numéro 1
Capsule
Identifiez numéro 2
Ribosomes
Identifiez numéro 3
Paroi
Identifiez numéro 4
Membrane cytoplasmique
Identifiez numéro 5
Nucléoïde
Identifiez numéro 6
Flagelle
Identifiez numéro 7
Inclusion
Identifiez numéro 8
Chomosome (ADN)
Identifiez numéro 9
Fimbriae
Expliquez le trajet du rayon dans un microscope confocal
Dans ce microscope, un rayon laser monochromatique illumine un objet habituellement rendu fluorescent. Seule la lumière provenant du plan focal sert à créer une image beaucoup plus nette. Un ordinateur est indispensable pour former des images confocales. Il reçoit les informations numérisées de chaque plan de l’objet examiné.
Expliquez le microscope électronique à balayage
Produit une image à partir des électrons réfractés par la surface de l’objet
Expliquez le microscope électronique à transmission
Les particularités du MET apportent des restrictions sévères quant à la nature et au mode de préparation des échantillons. Ils doivent être observés sous vide puisque les électrons sont défléchis par les molécules d’air.
Quel est ce microscope ?
Microscope optique
Quel est ce microscope ?
Microscope électronique à transmission
Quel est ce type de microscopie ? + expliquez son fonctionnement
Microscopie à épifluorescence.
Il va exciter un échantillon avec une lumière de longueur d’onde spécifique et forme une image avec une lumière fluorescente émise par l’objet.
Quel est ce microscope ?
Microscope à contraste de phase positif
Expliquez la production de contraste dans un microscope à contraste de phase positif
Comme les rayons tendent à s’annuler, l’image de l’échantillon sera sombre sur fond clair
Quel est ce type de microscope ?
Microscope à fond noir
Quelle est la méthode la plus utilisée pour identifier Mycobacterium tuberculosis et M. leprae ?
La coloration acido-alcoolo-résistante
Expliquez la coloration des endospores
Utilise la chaleur pour forcer l’entrée du colorant dans un endospore, une structure exceptionnellement résistante produite par des membres de certains genres (ex: bacillus et clostridium)
Décrire la coloration des capsules
Technique de coloration simple qui révèle la présence de capsules, habituellement des réseaux de polysaccharides entourant de nombreuses bactéries et certains champignons
Que va apporter la coloration des flagelles
Apporte des informations taxonomiques importantes sur la présence et le type de disposition des flagelles sur les cellules bactériennes et archéennes
Que fournit le microscope à fond noir ?
Fournit des images détaillées des cellules et des organismes vivants non colorés en modifiant simplement la façon dont ils sont éclairés. Un cône creux est dirigé vers l’échantillon de sorte que les rayons non réfléchis et non réfractés n’entrent pas dans l’objectif
Quel est le fonctionnement du microscope à contraste de phase ?
il va créer des différences d’intensité lumineuse qui donne un contraste permettant à l’observateur de voir une image plus claire et plus détaillée
Quel est le fonctionnement du microscope à contraste d’interférence différentielle (DIC) ?
Il produit une image en détectant des différences d’indice de réfraction et d’épaisseur
