14 - Techniques immunologiques Flashcards
Quelle est la technique immunologique la plus précise?
Radioimmunoassay
Décrire la technique de RIA ( radioimmunoassay)
Réaction de compétition entre un Ag radiomarqué connu et un Ag inconnu non-marqué.
On compare ensuite le tout à une coure d’étalonnage pour quantifier l’ag inconnu dans notre solution.
Quelle est l’utilité de l’immunoprécipitation? Décrire 2 facons de la faire et leur utilité
C’est une technique prépartive et analytique.
Billes magnétiques se lient à un Ac et on sépare le tout par un aimant = Technique de purification
Définir le titre d’une réaction
Concentration minimale d’Ac avec lequel on obtient une réaction positive dans un essai.
= 1/+ ↑ dilution qui donne une réaction positive
Décrire la technique d’immunofluorescence et son utilisé
On couple un Ac à un fluorochrome et on peux ensuite le quantifier puisque le fluorochrome ré-emet de la lumère après excitation
Définir la réaction d’hémaglutination
Test standard demandé par la FDA pour montrer l’efficacité d’un vaccin contre l’influenza. On incube le virus avec le serum et s’il y assez d’Ac pour immuniser, il y a un tappis.
Définir la cytométrie de flux (FACS) et ses applications/analyses
On colore des cellules et on les couple avec des Ac couplés à des fluorochromes. Les cellules passent devant un laser excitateur et analyse les cellules.
Analyse : Par histogramme ou Dot-plot
FACS-Sort : On donne une charge ç la cellule dépendant de sa composition et on sépare les cellules selon leurs charges (–, - +, ++)
Résumer un protocole d’ELISA indirecte. Dans quel processus médicale cette technique est-elle souvent utilisé?
1 - On induit le puit d’Ag
2 - Lavage
3 - On bloque l’Ag avec des Ac (ex le sérum de patient)
4 - Lavage
5 - On ajoute un Anti-Ac lié à un enzyme
6 - Lavage
7 - On ajoute le substrat de l’enzyme et s,Il y a couplage il y a de la coloration
Beaucoup utilisé pour la détection d’une maladie infectieuse. ex : VIH
Résumer le protocole d’une ELISA sandwhich. On cherche à détecter quoi?
On cherche à détecter un Ag
1 - On induit le puit d’Ac spécifique contre un Ag
2 - Lavage
3 - On bloque l’Ac avec l’Ag
4 - Lavage
5 - On ajoute un deuxième Ac qui reconnais l’Ag couplé à une enzyme
6 - Lavage
7 - On ajoute le substrat de l’enzyme et s,Il y a couplage il y a de la coloration
Décrire l’immuno essay de Bead-arrays
On fait une ELISA avec 20-40 puits et chaque puit contient une bille avec un Ac qui reconnait un Ag différent. On peut utiliser 1 échantillon de sérum pour détecter plusieurs Ag différents.
Décrire la technique d’immunobavardage-Western
On couple un Ac à un enzyme et on incube avec notre échantillon. On ajoute ensuite le substrat de cet enzyme pour détecter la présence d’un composé X
Quel est le mécanisme d’action d’un Dip-stick?
1 - On dépose un extrait et l’Ag se lie à des Ac marqués dans le puit.
2 - Mouvement par capilarité de l’échantillon
3 - Rencontre ligne 1 : autre Ac qui se lie à l’Ag. Ligne = couplage
4 - Ligne #2 = Ac contre Ac, C’est notre controle
Décrire le test de Latex agglunation
Semblable à l’hémaglutinnaiton mais vec des billes de latex. Agglutination = présence de l’Ac
