Zierer

Question 1

Agrobakterien vermittelter Gentransfer Mechanismus

Answer 1

1. Wundfaktoren locken Bakterium an
2. virA und virG bilden Zweikomponentensystem
3. Acetosyringon wird von virA wahrgenommen-> virA phosphoryliert-> Phosphat auf virG übertragen-> virG Signal an andere vir Gene übertragen
4. virD1, virD2, virC fügen am 5´-Ende an der Right boarder T-DNA ein Einzelstrangbruch ein-> virD2 bindet das Ende
5. T-Strang an der left boarder hydrolisiert-> vom Gegenstrang abgelöst-> gleichzeitig Lücke im Ti-Plasmid durch Reparatursynthese aufgefüllt
6. virE2 Proteine binden freie T-DNA-> bildet filamentöses Komplex aus ssDNA, die am 5´-Ende virD2 gebunden hat-> von virE2 umhüllt
7. virB Proteine am Ausschleußen der DNA beteiligt
8. virE integriert in Pflanzenmembran-> bildet Pore-> T-DNA in Pflanzenzellen wandert
9. virD und virE besitzen NLS- Sequenzen-> Import in Zellkern

Question 2

Nennen sie 6 Elemente, welche auf einem Agrobakterium Transformationsplasmid vorhanden sein müssen

Answer 2

Ori für E.coli, ori für Agrobacterium tumefaciens, Kanamycin Resistenz, left boarder, right boarder, Antibiotika Resistenz

Question 3

Nennen sie zwei Unterschiede zwischen TypII und TypIIs Restriktionsenzyme

Answer 3

TypII: schneidet innerhalb der Erkennungssequenz, die meist palindromisch sind. Es können sticky oder blunt ends entstehen
TypIIs: schneidet außerhalb der Erkennungsseuqenz, die asymmetrische DNA Sequenzen erkennen. Es entstehen sticky ends.

Question 4

Geben sie zwei unterschiedliche TypIIs Restriktionsenzyme an und die Art des Überhangs

Answer 4

Bpil und Bsal, die 4 bp lange, klebrige Überhänge haben.

Question 5

Warum sollte man, wenn man nach der Auftrennung noch weitere Experimente mit dem Protein machen möchte, keine SDS-PAGE machen?

Answer 5

Da die SDS die Proteine denaturiert und somit die Proteine für weitere Untersuchungen unbrauchbar wären.