Hofmann Flashcards
Wozu haben sie Ammoniumsulfat im Praktikum benutzt?
Ammoniumsulfat wurde zur Fällung der Proteine genutzt.
Wie wird die FBPase reguliert ?
a) allosterisch, über
- pH
- F-1,6-BP Substratkonzentration
- Mg2+ Konzentration
b) durch kovalente Modifikation
- Thioloxidation unter Ausbildung einer Disulfidbrücke->Inaktivierung
- (Umkehrung) Reduktion der Disulfidbrücke->Aktivierung
c) langandauernde, nichtoxidative Aktivierung durch
- Metallionen
- Substrat
- Substratanaloga
d) Hemmung durch das Endprodukt F6P (mit zunehmender Konzentration)
Was sagt ein Hill-Koeffizient von 2,3 aus ?
Ein Hill-Koeffizient von 2,3 sagt aus, dass die interagierenden Untereinheiten des Proteins 3 sein muss und diese Zahl nicht überschreiten darf. Und weil nH>1 ist, ist das Enzym positiv Kooperativ.
Was sagt ein sigmoider Kurvenverlauf aus ?
Ein sigmoider Kurvenverlauf sagt aus, dass das Enzym positiv Kooperativ ist und nicht nach dem Prinzip der Sättigungshyperbel geht.
Welche Komponenten dürfen in ihrem Rohextrakt nicht mehr vorhanden sein, wenn sie zur Proteinaufreinigung eine DEAE-Ionenaustauschchromatographie machen wollen?
DNA und RNA
Welche Eigenschaft macht man sich bei der säulenchromatographischen Auftrennung von Proteinen zunutze?
a) Gelfiltration:
Unterschiedlich große Moleküle wandern unterschiedlich schnell durch die Säule (große schneller als kleine)
b) Affinitätschromatographie:
spezielle Bindeeigenschaften des Zielmoleküls werden genutzt um es spezifisch an die Säule zu binden
c) Hydrophobe Chromatographie:
Bindung hydrophober Moleküle an die hydrophobe Säule
d) Ionentauscherchromatographie:
spezifische Bindung des Zielproteins über seinen isoelektrischen Punkt (pH-abhängig)
Elution erfolgt über Erhöhung der Salzkonzentration und pH-Änderung, die die Bindeeigenschaften verändert
Woran erkennt man ein kooperatives Enzym?
a) über ihre Bindekurven:
- nicht kooperatives Enzym: Sättigunghyperbel
- positiv kooperatives Enzym: sigmoides Bindeverhalten
- negativ kooperatives Enzym: pseudohyperboles Bindeverhalten
b) über den Hill-Koeffizienten:
- nH gibt Mindestanzahl an Untereinheiten an
- nH > 1 ->positiv Kooperatives Enzym
- nH < 1 ->negativ Kooperatives Enzym
Was ist eine gängige Methode zur Konzentration eines Proteinextraktes?
Reinigung des Proteinextraktes mittels Ionenaustauschchromatographie
Was ist eine gängige Methode zur Bestimmung der Konzentration eines Proteinextrakts?
Bradford-Test: Adsorption von Coomassie Brillant Blau an Protein verursacht Verschiebung des Absorptionsmaximums von 465 nach 595 nm. Über Absorptionsmessung bei 595 nm kann Proteinkonzentration bestimmt werden.
