Western Blot

Question 1

מהו western blot?

Answer 1

זן טכנולוגיה שתפקידה לבדוק נוכחות חלבונים על ידי שימוש בנוגדן ספציפי, אבל מלווה במשקל מולקולרי של אותו חלבון.

Question 2

מהם השלבים העיקריים בתהליך של ווסטרן בלוט?

Answer 2

1. אלקטרופורזה
2. העברת חלבונים לממברנה כדי להגיב את החלבון עם נוגדן.
3. הדגרה בתנאים אופטימליים עם נוגדן מתאים
4. דטקציה ע”י פרוב שמכיל סמן (רדיואקטיבי
   , פלורסנטי, אנזימתי)

Question 3

מה זה SDS?

Answer 3

דטרגנט אניוני אשר מפרק מולקולות הידרופוביות. הוא מפרק חלבונים לרמה של מבנה ראשוני ונקשר אליהם. הוא מעניק מטען שלילי לחלבון.

Question 4

באיזה ג’ל אנחנו בוחרים אם אנו מעוניינים בקבלת חלבונים שיכסה טווח רזולוציה גבוה?

Answer 4

אפשר לבנות גרדיאנט רציף של ג’ל לדוגמא, בין 7%-15% כאשר אחוז הג’ל הגבוה יהיה למטה ואחוז הג’ל הנמוך יהיה למעלה.

Question 5

מה זה IP?

Answer 5

Immunopercipitation

זה שיקוע אימוני. מאפשר לבודד אנטיגנים מתוך רקמה/ תערובת חלבונים על מנת לבצע אנליזות שונות לאחר מכן

Question 6

מתי נשתמש ב IP?

Answer 6

כאשר האנליט הנבדק נמצא בריכוזים נמוכים, לכן יש צורך להעשיר אותו ולנקות אותו.

Question 7

מה השיטה IP מסוגלת לבדוק ואחרי מה לעקוב?

Answer 7

לעקוב אחר סינתזה של חלבון

לבדוק אינטראקציה בין חלבונים

Question 8

מהם השלבים העיקריים בIP?

Answer 8

1. מתוך רקמה/תאים שמכילים תערובת חלבונים מבצעים 2. הפקה של תערובת החלבונים על ידי ביצוע ליזיס של התאים על מנת להפיק את החלבונים. 3. מבודדים את האנטיגן ע”י הדגרה עם נוגדן ספציפי לאנטיגן.
2. פרסיפיטציה שיקוע של הקומפלקס של האנטיגן והנוגדן ע”י שימוש במצע תומך. 5. שטיפה 6. אנליזה של הקומפלקס שנוצר ע”י sds page, western blot

Question 9

מהם 3 השלבים לשימוש בחלקיקים פרה מגנטיים?

Answer 9

1. הדגרה של כלל החלבונים עם הנוגדן הספציפי נגד האנליט.
2. הדגרה עם הנוגדן השניוני שקשור לחלקיק הפרה מגנטי.
3. אלוציה בה משחררים את האנטיגן והנוגדן מהחלקיקים הפרה מגנטיים.