VIRUS S4 Flashcards
Importancia a nivel individual
Es muy importante conocer el agente etiológico de las infecciones virales en aquellas que pueden llegar a ser letales, en las cuales se pueden desarrollar estrategias o intervenciones de gestión (como los tratamientos antivirales), y en las que tienen un curso crónico (a fin de proveer un óptimo seguimiento y tratamiento al paciente afectado).
Importancia a nivel de salud pública
- Mantener los bancos de sangre libres de virus para disminuir la transmisión por esta vía.
- Supervisar y seguir los programas de vacunación.
- Identificar brotes.
- Reconocer la presencia de virus no habituales.
- Identificar la circulación de nuevos agentes.
Enfoque del diagnóstico virológico
El diagnóstico virológico se puede enfocar desde dos aspectos:
- Diagnóstico viral clínico: el médico a través de signos y síntomas de alguna patología viral orienta la etiología
infecciosa (ej. peste cristal con su sintomatología me orienta a una infección por varicelas zoster). - Diagnóstico viral laboratorio: hay muchas situaciones en las cuales se necesita confirmar el agente etiológico vía laboratorio a partir de una muestra correcta.
Muestra adecuada
Para obtener una muestra correcta debemos considerar:
- Aspectos del paciente y la situación epidemiológica (ej. lactante o mayor / verano o invierno/ hay diferente circulación de virus).
- Tener clara la estructura y patogenia viral del agente etiológico que se sospecha.
- Qué se busca conocer del agente infeccioso, sobre el virus o la respuesta inmune, en base a esto dependerá la técnica diagnóstica que se va a requerir.
Ejemplo de toma de muestra respiratoria
Un ejemplo de toma de muestra respiratoria es el torulado nasofaríngeo en el cual se usa un cepillo muy fino para detectar células epiteliales de la nasofaringe, la muestra se transporta a través de un tubo para mantener los componentes del virus. Otra forma de toma de muestra respiratoria es el aspirado nasofaríngeo, este requiere de un aparato de succión y un catéter estéril de succión.
Tipos de muestras hepatitis
Sangre, deposiciones
Tipo de muestras exantemas
Células basales de lesiones o hisopado nasofaríngeo. Biopsia Sangre Deposiciones
Evolución de las infecciones virales
En las infecciones agudas con la infección hay un desarrollo de síntomas y signos visibles y clínicamente detectables, tras los cuales el hospedero por su RI logra eliminar al agente, mientras que en las infecciones persistentes el virus permanece en el hospedero. En las infecciones latentes la infección perdura para toda la vida, existen etapas de activación vírica con partículas, antígenos y genoma, y otras en etapa de latencia donde lo único que podría hallarse sería genoma viral almacenado en el núcleo de las células donde el virus hace latencia, por tanto, podría ocurrir que se detecte genoma viral de un virus y que en realidad el cuadro clínico sea causado por otro virus. En el caso de las infecciones crónicas siempre se pueden detectar componentes víricos ya que el virus replica activamente.
Traslado de muestras
- Siempre se debe hacer en frio.
- A 4°C usando hielo húmedo o sistemas refrigerantes.
- Utilizar medios de transportes adecuados que cumplan con todas las normas de bioseguridad.
- No conviene congelar y descongelar pues se disminuye la viabilidad del virus, ya que como sabemos las estructuras de los virus muchas veces tienen manto y ante los cambios de temperatura ese manto puede desestabilizarse o lo que también puede ocurrir es que sea el propio genoma el que se vea alterado.
- Depende de la técnica el medio de transporte más adecuado.
Estructura y dx viral
Tipo de genoma
Diseño de ensayos de detección
Posibilidad de variabilidad
Mantención en laboratorio
Estructura y dx viral
Antígenos virales
Diseño de ensayos de detección
En qué momento de la infección
Implicancias en el desarrollo de vacunas
Patogenia viral y dx
Virus dengue vs hepatitis A
En la imagen de la izquierda se ven los marcadores de
laboratorio de una infección por virus dengue, tras infectarse el individuo comienzan a aparecer los síntomas y signos de la enfermedad y en forma paralela hay hallazgos de replicación viral (genoma, partículas virales, proteínas virales). Si la muestra se toma más tardíamente se encontrarían moléculas de la respuesta inmune en vez de partículas o proteínas virales.
Por otra parte, al ver la infección por hepatitis A se da cuenta que los síntomas y signos aparecen más bien de forma tardía, por lo tanto, al momento de realizar el diagnóstico la cantidad de virus ya está disminuida y se hace más difícil que las pruebas puedan detectar a los componentes virales, sin embargo, la respuesta inmune está alta pudiendo hacerse el diagnostico confirmatorio a través de la detección de IgM.
Contribución del Diagnóstico Virológico
Individual
Definir intervención terapéutica
Orienta pronóstico
Monitoreo de respuestas terapéuticas
Contribución del Diagnóstico Virológico
Vigilancia epidemiológica
Brotes
Implantación de medidas de control
Monitoreo de infecciones emergentes y re-emergentes
Seguimiento de inmunización
Detección del Virus
Agente vital completo
● Microscopía electrónica.
● Aislamiento viral.
Detección de la respuesta inmune
Anticuerpos
● Técnicas para detectar anticuerpos (serología).
Detección del Virus
Componentes virales
● Antígeno: Inmuno análisis. IF, IFI, ELISA, IC.
● Genoma: Métodos moleculares. PCR, PRC RT, TMA, LAMP.
Microscopía Electrónica
No se utiliza de forma rutinaria en el diagnóstico clínico, se utiliza en la investigación. Visualizamos directamente el agente viral, pero requiere de gran cantidad de partículas (limitada sensibilidad).
Aislamiento Viral
En esta técnica se busca si en la muestra hay partículas virales con capacidad infectiva (replicativa). La muestra se debe trasladar en frío, se inocula en células susceptibles y permisivas en el laboratorio. Se espera y si se verifica si hay un efecto citopático que permita discriminar la existencia de replicación viral.
No se usa en clínica.
Aislamiento Viral
Ventajas
✓ Permite ver si hay un virus viable (con capacidad infectiva).
✓ El medio donde se cultiva el virus hay replicación, por lo que se generan más virus para estudios posteriores.
✓ Se puede utilizar para el estudio de nuevos virus
Aislamiento Viral
Desventaja
✓ El efecto citopático (ECP) puede demorar y no se puede esperar 1 o 2 semanas para el diagnóstico.
✓ Pueden haber coinfecciones, las cuales NO se pueden discriminar.
✓ No hay modelo celular para todos los virus
✓ Se requiere de una gran infraestructura de laboratorio.
Antígeno: Inmunoanálisis
El inmunoanálisis es la reacción en la cual se tiene la reacción entre un antígeno y un anticuerpo, y de alguna manera se logra visualizar dicha interacción.
Antígeno: Inmunoanálisis
Método directo
Se tiene al antígeno y a un anticuerpo que se encuentra marcado.
Antígeno: Inmunoanálisis
Método indirecto
Se tiene el antígeno, un anticuerpo antiviral y además un segundo anticuerpo anti-anticuerpo el cual posee el marcador.
El nombre de la técnica está asociada al método de detección del anticuerpo.
Radioisótopo → Radioinmunoanálisis
Fluorocromo → Inmunofluorescencia
Enzimático → Técnica de ELISA
Sustrato fluorogénico → ELFA
Inmunofluorencia Indirecta (IFI)
1) Se toma una muestra con células infectadas (o en sospecha).
2) Se agrega un anticuerpo específico para el antígeno viral para que se produzca la interacción.
3) Se agrega un segundo anticuerpo marcado con fluorocromo.
4) Para poder visualizar la interacción, se debe hacer incidir una luz sobre la muestra, lo que se lleva a cabo en un microscopio de fluorescencia.
Virus: VRS, parainfluenza, Flu A y B, adenovirus, metapneumovirus.
Esta técnica permite hacer vigilancia. En la vigilancia centinela se hace la búsqueda del virus de influenza.
Ensayo Inmunoabsorbente Asociado a Enzima (ELISA)
Técnica de Captura /Sandwich ELISA
1) Se tiene un pocillo con anticuerpo anti antígeno de captura.
2) Se agrega la muestra, esperando que interaccione.
3) Se agrega un anticuerpo marcado anti antígeno asociado a enzima
4) Para visualizarlo se agrega un sustrato y por acción enzimática se convertirá en un producto determinado que genera cambio de color (si es positivo).
Ensayo Inmunoabsorbente Asociado a Enzima (ELISA)
Técnica Indirecta
1) Se tiene un pocillo con anticuerpo anti antígeno de captura.
2) Se agrega la muestra, esperando que interaccione.
3) Se agrega un anticuerpo NO marcado anti antígeno.
4) Se añade un anticuerpo anti anticuerpo marcado asociado a enzima.
5) Para visualizarlo se agrega un sustrato y por accion enzimática se convertira en un producto determinado que genera cambio de color (si es positivo).
Inmunoensayo: Inmunocromatografía (Test rápido)
A diferencia de los otros análisis que demoran 2-4 horas, estos ensayos demoran 10-15 minutos. Detecta antígeno.
1) Se añade la muestra y se agrega un buffer (con anticuerpos marcados para el antígeno) a la tira reactiva, y estos comienzan a migrar a través de la membrana de microcelulosa.
2) Primero, se encuentra con anticuerpos de captura contra el antígeno específico. El antígeno al tener unido el anticuerpo marcado comenzará a producir una señal positiva (primera banda).
3) Después, se encuentra otro anticuerpo que permite hacer un ensayo control: Hay un anticuerpo contra el anticuerpo marcado para verificar el funcionamiento de la reacción. Si el test está funcionando, se marcará la segunda banda.
Es rápido y de bajo costo, pero la sensibilidad es variable según el ensayo e infección. Sirve en periodos de alta prevalencia de la infección. Es poco sensible (gran cantidad de falsos negativos), pero específico (prácticamente no da falsos positivos).
Ensayo rápido VIH:
Detección de antígenos y anticuerpos
Amplificación del Blanco (NAAT)
Puede ser por amplificación de DNA (PCR) y por amplificación de RNA (TMA).
Para los métodos moleculares la muestra a tomar dependerá del patógeno que se quiera detectar, además se deben extraer los ácidos nucleicos (DNA y/o RNA).